Analisi PCR per 5 infezioni. L’analisi PCR è il test più accurato per le infezioni. Il metodo PCR lo consente

Per un trattamento di successo soprattutto punto importanteè una diagnosi rapida e senza errori. IN Ultimamente L'elenco dei metodi e delle capacità di centri diagnostici, cliniche e ospedali nel campo della diagnostica è in continua espansione. Dopo l'avvento di una tecnica relativamente nuova: l'analisi PCR, questo metodo ha rapidamente guadagnato aderenti tra gli operatori sanitari, poiché è spesso indispensabile per identificare le malattie infettive.

L'ambito di applicazione del metodo basato sulla reazione a catena della polimerasi non si limita alla medicina, ma la diagnostica PCR è diventata più diffusa per l'identificazione di varie malattie.

I vantaggi innegabili della PCR includono quanto segue:

Sensibilità molto elevata. Solitamente si parla di sensibilità dal 95 al 100%, ma questi sono dati medi. Questo indicatore differisce per diversi microrganismi. Quindi, per l'epatite C non è mai inferiore al 97% (a condizione che tutti i requisiti siano soddisfatti) e per determinare l'ureaplasmosi - almeno il 99%. Questa sensibilità è la più alta al momento, quindi il metodo non ha quasi concorrenti in termini di questa caratteristica.
Possibilità di utilizzo nelle primissime fasi. In un momento in cui altri metodi diagnostici non sono ancora in grado di identificare l'agente patogeno a causa della sua piccola quantità nel campione, la PCR produce già il risultato corretto. La presenza di un agente patogeno può essere rilevata anche in presenza di un singolo campione e, in alcuni casi, solo di un frammento del microbo. Per questo motivo il metodo viene utilizzato anche per patologie croniche o latenti, oltre che nella fase di incubazione.
Ampia gamma di risultati. L'analisi è in grado di identificare più agenti patogeni contemporaneamente; ciò non richiede manipolazioni ripetute. A volte è possibile individuare agenti patogeni che non erano nemmeno previsti durante la diagnosi iniziale.
Versatilità dei campioni. Il campione può includere campioni di sangue, saliva, espettorato, capelli, perdite vaginali e cellule di vari tessuti.
Velocità nell'ottenimento dei risultati. Nella maggior parte dei casi, la risposta viene ricevuta entro 5-6 ore. Per un test di coltura che si avvicina alla reazione a catena della polimerasi in termini di accuratezza, lo stesso risultato può essere ottenuto in un periodo compreso tra pochi giorni e un paio di settimane.
Determinazione quantitativa dell'agente patogeno. Questo parametro consente di determinare il titolo dei microbi nel materiale e questa proprietà è spesso necessaria per valutare l'efficacia delle tattiche di trattamento scelte.
Identificazione del microrganismo stesso e non determinazione delle sue reazioni. La maggior parte delle analisi si basa sulla risposta dell'agente patogeno ai reagenti chimici, alla colorazione, ecc. Questo metodo diagnostico consente di rilevare direttamente il microbo e non segni indiretti, anticorpi, ecc.

Nonostante un elenco così ampio di vantaggi, il metodo presenta anche alcuni svantaggi:

Potrebbe verificarsi un falso rilevamento di microrganismi a causa della contaminazione del campione da un campione precedente. Ciò si verifica quando gli strumenti o i reagenti coinvolti nell'analisi sono contaminati. Anche nell'aria ci sono frammenti di microbi che possono influenzare i risultati, quindi in tali laboratori deve essere installato un filtro biologico con il massimo grado di purificazione dell'aria.
Risultato falso negativo. Anche con tutte le manifestazioni evidenti della malattia, a volte si ottengono dati negativi. La ragione di ciò è il luogo sbagliato per la raccolta del campione, quindi il personale di laboratorio deve avere qualifiche, conoscenze ed esperienza sufficienti.
I dati dovrebbero essere valutati esclusivamente dal medico curante, poiché l'interpretazione dei risultati dell'analisi PCR è un processo complesso. Una risposta positiva non sempre significa malattia. Il fatto è che dopo che la malattia è stata trattata con successo, frammenti dell'agente patogeno sono presenti nel sangue per molto tempo, quindi solo uno specialista molto qualificato può trarre una conclusione.
Costo elevato della diagnostica mediante reazione a catena della polimerasi. Il prezzo è dovuto alle attrezzature costose e agli elevati requisiti per le condizioni di laboratorio e le qualifiche del personale.

Condizioni obbligatorie per ottenere dati accurati nei laboratori PCR:

corretto meccanismo di raccolta dei campioni e loro corretto trasporto al laboratorio;
rigorosa aderenza ai metodi durante l'analisi;
elevata sterilità e massima automazione del processo;
utilizzo di strumenti monouso;
sistema di controllo di laboratorio interno per confermare l'affidabilità dei dati.

A condizione che tutti i requisiti siano soddisfatti, sulla base dei dati ottenuti con la tecnica PCR, è possibile non solo determinare la malattia, ma fare una prognosi del suo decorso e creare un algoritmo di trattamento.

L'essenza del metodo

La reazione a catena della polimerasi consente di copiare e riprodurre rapidamente le catene di DNA del microbo che ha causato la malattia. Affinché il processo proceda rapidamente, vengono utilizzati speciali preparati enzimatici che accelerano la replicazione e la costruzione di una catena di nucleotidi.

Una volta completata la procedura, la presenza dell'agente patogeno nel campione aumenta milioni di volte, dopodiché il suo rilevamento e identificazione non rappresentano più un problema.

Il tecnico di laboratorio può confrontare il campione risultante con quelli presentati nel database e denominarlo con precisione, nonché determinarne la quantità originale.

Inoltre, la tecnica consente di clonare singole sezioni di una catena di DNA, causare in esse le mutazioni necessarie e combinare e combinare sezioni tra loro.

Aree di applicazione

La diagnostica PCR è ampiamente utilizzata in medicina. Con il suo aiuto, puoi identificare malattie virali, infettive, ereditarie e questo può essere fatto non solo nella fase attiva, ma anche immediatamente dopo l'infezione.

Aree della medicina in cui il metodo PCR viene utilizzato attivamente per la diagnostica:

urologia e ginecologia - per rilevare la maggior parte delle malattie sessualmente trasmissibili (ureaplasmosi, herpes, sifilide, gonorrea, gardnerellosi, tricomoniasi, clamidia, HIV, micoplasmosi, papillomavirus umano, candidosi, ecc.);
pneumologia - per tubercolosi o polmonite di natura batterica o virale;
gastroenterologia - per elicobatteriosi;
in ematologia - con citomegalovirus, vari oncovirus del sangue;
nel campo delle malattie infettive - per rilevare difterite, salmonellosi, mononucleosi, listeriosi, epatite di origine virale, encefalite;
in oncologia - per determinare il cancro al seno, la leucemia, il linfoma.

Questo metodo viene utilizzato anche in neonatologia, pediatria, oftalmologia, neurologia: in quasi tutte le branche della medicina si è dimostrato necessario.

Il video descrive in dettaglio quali infezioni possono essere rilevate utilizzando la reazione a catena della polimerasi.

La maggior parte delle malattie sessualmente trasmissibili vengono diagnosticate rapidamente e con successo grazie alla diagnostica PCR. Oltre a identificare l'agente patogeno, questo metodo consente di scoprire il ceppo specifico del microrganismo, consentendo di selezionare il farmaco più efficace per il trattamento.

Oltre alla medicina, il metodo PCR viene utilizzato anche in altri settori:

Medicina legale e medicina legale: aiuta a identificare un criminale confrontando il materiale genetico del sospettato con campioni trovati sulla scena del crimine.
Stabilire la paternità: vengono confrontati i set genetici moltiplicati del genitore e del figlio, vengono trovati frammenti identici, sulla base dei quali si può giudicare il grado della loro relazione.
La scienza utilizza la metodologia durante gli esperimenti utilizzando mutazioni genetiche, stabilendo la relazione dei rami evolutivi dei singoli organismi, ecc.

Diagnostica PCR in venereologia

Molte infezioni che causano malattie veneree, nelle fasi iniziali sono molto simili nelle manifestazioni e nei sintomi, quindi è abbastanza difficile differenziarli. Allo stesso tempo, l'identificazione precoce dell'agente infettivo consente di iniziare il trattamento il più presto possibile e di ridurre al minimo i tempi di trattamento, evitando lo sviluppo di possibili complicanze.

La reazione a catena della polimerasi è un meccanismo efficace per identificare i seguenti gruppi di malattie genitali:

infezioni batteriche (sifilide, donovanosi, gonorrea, clamidia, ecc.);
patologie virali (papillomatosi, condilomatosi, HIV, herpes genitale, ecc.);
funghi (mughetto, balanopostite, ecc.)

In dermatovenereologia è particolarmente utile la proprietà di questa tecnica di individuare agenti infettivi durante i periodi di remissione o durante il trasporto, quando una persona può infettare i partner senza presentare sintomi della malattia.

Progresso dell'analisi della reazione a catena della polimerasi

L’analisi PCR avviene in 4 fasi principali:

preparazione di materiale per la copiatura;
combinare un frammento di DNA e un primer;
copiare il set genetico del materiale studiato;
identificazione e valutazione del set di DNA risultante.

Fase 1

Il campione viene riscaldato ad una temperatura di 94-98°C in un dispositivo speciale, un termociclatore, programmato per mantenere temperature precise con un errore basso. La temperatura impostata viene mantenuta per un minuto o due. Ciò è necessario per denaturare il DNA in modo che la doppia elica si separi in due filamenti separati.

Fase 2

La temperatura nel termociclatore viene ridotta a 72-75°C in modo che il primer possa riconoscere un tratto della catena del DNA ad esso simile e combinarsi con esso.

I primer sono reagenti speciali adatti solo per un tipo di agente patogeno. Se è necessario analizzare più agenti patogeni, al campione viene aggiunto il numero richiesto di primer.

In questa fase, il DNA replica il suo modello utilizzando un primer.

Le capacità del laboratorio sono limitate dalla disponibilità di primer per microrganismi specifici, quindi la gamma di possibilità è determinata dalla disponibilità di tali campioni.

Fase 3

In questo segmento si verifica un aumento del materiale genetico dell'agente patogeno. Un enzima si avvicina al primer con lo stampo e riproduce un nuovo filamento di DNA identico a quello contenuto nel filamento originale.

Una volta completata la sintesi, viene completato un ciclo completo della reazione a catena della polimerasi. Nel tempo dura in media fino a 3 minuti. Durante questo periodo, il materiale raddoppia. Un ulteriore aumento del numero di catene avviene in progressione geometrica, ed alla fine dell'analisi sono stati completati 50-80 cicli.

Fase 4

Una fase che richiede attenzione e cura particolare da parte dello staff.

La determinazione del microrganismo avviene mediante elettroforesi o segni di colorazione. Quando si utilizza l'elettroforesi, il fattore determinante è la lunghezza dei frammenti di DNA e, quando si utilizzano le etichette, lo sviluppo del colore durante la reazione enzimatica.

Tipi di test PCR

Esistono molte varianti di tale diagnostica PCR. La scelta di un particolare metodo dipende da molti fattori: la diagnosi presuntiva, le capacità dei laboratori disponibili, il metodo di raccolta del materiale, ecc.

I tipi di PCR più comunemente utilizzati sono:

nidificato;
fatto un passo;
con avviamento a caldo;
virtuale;
asimmetrico;
in tempo reale, ecc.

Viene utilizzata prevalentemente la PCR in tempo reale, poiché il metodo è caratterizzato dai risultati più accurati e dalla massima velocità di elaborazione dei dati. Dopo averlo usato, la conclusione è pronta in un'ora o due.

Il metodo è ampiamente utilizzato in pediatria per rilevare virus e infezioni del sangue, malattie genetiche e infezioni TORCH. I neonatologi prescrivono tale diagnostica in casi problematici letteralmente fin dai primi giorni di vita. A volte tale diagnostica consente di rilevare l'infezione dei fluidi intrauterini, che costituiscono un pericolo per lo sviluppo del feto durante il periodo di formazione attiva.

Se un medico emette un rinvio per un esame utilizzando la reazione a catena della polimerasi, deve chiarire quale tipo di biomateriale deve essere fornito al paziente e come prepararsi per la raccolta del campione.

Analisi del sangue

Il sangue viene prelevato come biomateriale per i test se si sospetta l'HIV, l'epatite virale, il toxoplasma, l'herpes genitale e la citomegalia. Per la maggior parte di questi agenti patogeni, prima dell'uso di questo metodo, la diagnosi si basava sul rilevamento degli anticorpi contro l'agente patogeno, il che ritardava notevolmente il tempo di rilevamento dei microbi durante il periodo in cui gli anticorpi non erano ancora stati prodotti.

Prima di donare il sangue per la diagnosi in questo caso non sono necessarie preparazioni particolari, ma è meglio prelevare il campione a stomaco vuoto. L'unica circostanza che può falsare seriamente i risultati è l'uso di antibiotici, quindi il test dovrebbe essere preceduto da un periodo di diversi giorni o settimane dopo l'assunzione di tali farmaci, a seconda del tipo di antibiotico.

Nelle cliniche più moderne, sono stati recentemente utilizzati sistemi di vuoto per raccogliere il sangue per la PCR, che danneggiano minimamente la pelle e riducono al minimo la probabilità che contaminanti provenienti dall'aria, dagli strumenti o dalle mani dei tecnici di laboratorio entrino nel campione.

Analisi dello striscio

Viene utilizzato sia in ginecologia che in venereologia per determinare le malattie sessualmente trasmissibili. Lo striscio PCR viene spesso prescritto durante la gravidanza per identificare fattori nascosti che possono influenzare negativamente la formazione del feto o il corso della gravidanza.

La preparazione per la selezione del materiale consiste nell'eliminare completamente i rapporti sessuali diversi giorni prima della procedura. È vietata anche la pulizia con permanganato di potassio o infusi di erbe. Durante i giorni critici e nei 2 giorni successivi non viene prelevato uno striscio per l'analisi PCR.

Il biomateriale viene raccolto in laboratorio dalla vagina, dalla cervice, dal canale cervicale o dall'uretra.

L'analisi PCR di uno striscio consente di identificare un agente patogeno resistente a un determinato tipo di antibiotico. Inoltre, le indicazioni per questo tipo di esame diagnostico sono:

gravidanza complicata senza motivo apparente;
decorso acuto della malattia venerea;
sospetto decorso cronico di una malattia venerea;
identificare le cause di infertilità o di aborti spontanei.

Analisi delle feci

Uno specialista prescrive un test delle feci utilizzando la reazione a catena della polimerasi per determinare la presenza di un'infezione. La preparazione per la raccolta di un campione di feci per la PCR è la seguente:

eliminare i lassativi sotto forma di supposte, oli o farmaci per via orale per diversi giorni;
Non consumare farmaci o alimenti che conferiscono alle feci un colore distinto il giorno prima.

È meglio consegnare il materiale per la determinazione della PCR in un contenitore speciale per feci con un bastoncino. L'interno del contenitore è sterile e non deve essere pulito o lavato. Quando si raccoglie un campione, è importante assicurarsi di non toccare la superficie interna del ricevitore e che non vi siano tracce di urina nel campione. Prima della selezione è vietato l'uso di clisteri.

Analisi delle urine

Questo studio PCR consente di estrarre un campione di DNA di un virus o di un batterio. È meglio raccogliere l'urina al mattino a stomaco vuoto. È meglio se ciò avviene direttamente in laboratorio.

Condizioni di preparazione obbligatorie per ottenere i risultati dei test delle urine in un laboratorio di reazione a catena della polimerasi:

attendere 3 settimane dopo l'assunzione di antibiotici;
non bere né mangiare prima di aver raccolto i liquidi;
divieto di sesso vaginale un giorno prima del prelievo;
È necessario posizionare la prima porzione di materiale nel contenitore dopo il risveglio.

Interpretazione dei risultati

I risultati diagnostici vengono decifrati dallo specialista che ha indirizzato il paziente al test PCR. Il protocollo emesso dal laboratorio può includere un risultato PCR negativo o positivo:

Negativo: un caso in cui non sono stati trovati frammenti dell'agente eziologico della presunta malattia, cioè la persona è sana e non ha sofferto di questa malattia recentemente.
Positivo: nel campione viene rilevato RNA o DNA di un agente patogeno e la persona necessita di cure.

Non dovresti interpretare i dati ottenuti da solo, poiché le norme di età possono differire in modo significativo e titoli diversi indicano stadi della malattia e approcci alla terapia completamente diversi.

Armato dei risultati della diagnostica PCR, sarà facile per il medico determinare l'elenco delle misure terapeutiche necessarie.

L'accuratezza della diagnostica PCR ha reso questa tecnica indispensabile per diagnosticare un vasto elenco di malattie e ha permesso di identificare ed eliminare in modo più efficace i processi patogeni che si verificano nel corpo umano.

La reazione a catena della polimerasi (PCR) è un metodo di alta precisione nel campo della diagnosi di patologie ereditarie, infezioni, malattie virali in qualsiasi fase (acuta o cronica), nonché - in una fase iniziale - prima di manifestazioni evidenti della malattia identificando agenti patogeni in base al loro DNA, RNA, che è materiale genetico, in campioni ottenuti dal paziente. E oggi parleremo dell'essenza, delle fasi diagnostiche e dei principi dei metodi di reazione a catena della polimerasi (PCR), nonché del suo costo.

Cos'è la reazione a catena della polimerasi

La base dell'analisi è l'amplificazione (raddoppio) - la creazione di molte copie da una breve sezione di DNA (acido desossiribonucleico), che rappresenta il complesso genetico umano. Lo studio richiede una quantità molto piccola di sostanza fisiologica (espettorato, feci, raschiati epiteliali, succo prostatico, sangue, sperma, liquido amniotico, muco, tessuto placentare, urina, saliva, liquido pleurico, liquido cerebrospinale). In questo caso, ad esempio, è possibile rilevare anche un solo microbo dannoso nel tratto genito-urinario del paziente.

La tecnica PCR (reazione a catena della polimerasi) è stata sviluppata dallo scienziato americano K. Mullis, che ha ricevuto il Premio Nobel nel 1993.

Utilizzato attivamente:

nella diagnosi precoce delle infezioni, genetiche;
nell'esame medico legale quando è disponibile una quantità estremamente piccola di DNA per l'esame;
V medicina Veterinaria, farmaceutico, biologia, genetica molecolare;
per l'identificazione di una persona mediante DNA, conferma della paternità;
in paleontologia, antropologia, ecologia (nel monitoraggio della qualità dei prodotti, dei fattori ambientali).

Questo video ti spiegherà in dettaglio cos'è la reazione a catena della polimerasi:

A chi è prescritto?

La reazione a catena della polimerasi nella diagnosi delle malattie infettive è uno dei metodi più affidabili di particolare precisione e affidabilità. Ad esempio, l'affidabilità dell'analisi PCR per la clamidia e molti altri agenti patogeni è vicina al 100% (assoluta). Molto spesso, la procedura di reazione a catena della polimerasi viene prescritta a pazienti che hanno difficoltà a identificare un agente patogeno specifico durante la diagnosi.

Il test PCR di laboratorio viene utilizzato:

per rilevare agenti patogeni, causando infezione organi urinari e genitali difficili da identificare mediante coltura o metodi immunologici;
per la nuova diagnosi dell'HIV nella fase iniziale in caso di risultato positivo ma discutibile del test iniziale (ad esempio, nei neonati di genitori affetti da AIDS);
identificare il cancro in una fase iniziale (studio delle mutazioni dell'oncogene) e adattare individualmente il regime di trattamento per un particolare paziente;
ai fini della diagnosi precoce e del potenziale trattamento delle patologie ereditarie.

Pertanto, i futuri genitori fanno un test per scoprire se sono portatori di una patologia genetica; nei bambini, la PCR determina la probabilità di esposizione a una malattia trasmessa per via ereditaria.

rilevare patologie fetali nelle prime fasi della gestazione (le singole cellule dell'embrione in crescita vengono esaminate per la presenza di possibili mutazioni);
nei pazienti prima del trapianto d'organo - per la “tipizzazione dei tessuti” (determinazione della compatibilità dei tessuti);
identificare organismi patogeni pericolosi nel sangue donato;
nei neonati - per identificare le infezioni nascoste;
valutare i risultati del trattamento antivirale e antimicrobico.

Perché sottoporsi ad una procedura del genere?

Poiché la PCR è un metodo diagnostico altamente efficace, che fornisce risultati quasi al 100%, viene utilizzata la procedura:

confermare o escludere la diagnosi definitiva;
rapida valutazione dell’efficacia della terapia.

In molti casi, la PCR è l’unico test possibile per individuare una malattia in via di sviluppo se altri metodi diagnostici batteriologici, immunologici e virologici sono inutili.

I virus vengono rilevati mediante una procedura PCR immediatamente dopo l'infezione e prima che compaiano i segni della malattia. La diagnosi precoce del virus consente un trattamento tempestivo.
Anche la cosiddetta “carica virale” (ovvero il numero di virus presenti nell’organismo) viene determinata mediante analisi del DNA utilizzando un metodo quantitativo.
I patogeni specifici (p. es., il bacillo della tubercolosi di Koch) sono difficili e richiedono troppo tempo per la coltura. I test PCR consentono il rilevamento rapido di agenti patogeni minimi (vivi e morti) in campioni adatti per i test.

Viene utilizzata l'analisi dettagliata del DNA dell'agente patogeno:

determinare la sua sensibilità a tipi specifici di antibiotici, che consente un trattamento immediato;
controllare la diffusione di epidemie tra gli animali domestici e selvatici;
identificare e monitorare nuove specie microbiche infettive e sottotipi di agenti patogeni che hanno alimentato precedenti epidemie.

Tipi di diagnostica

Metodo standard

L'analisi della reazione a catena della polimerasi viene effettuata sulla base dell'amplificazione multipla (raddoppio) di un frammento specifico di DNA e RNA utilizzando speciali enzimi primer. Come risultato della catena di copia, si ottiene una quantità sufficiente di materiale per la ricerca.

Durante la procedura viene copiato solo il frammento desiderato (corrispondente alle condizioni specifiche specificate) e se è effettivamente presente nel campione.

Questo video dettagliato con diagrammi utili spiega come funziona la PCR:

Altri metodi

PCR in tempo reale. In questo tipo di ricerca, il processo di identificazione di un dato frammento di DNA inizia dopo ogni ciclo, e non dopo aver completato l'intera catena di 30 - 40 cicli. Questo tipo di ricerca consente di ottenere informazioni sulla quantità di un agente patogeno (virus o microbo) nel corpo, ovvero di effettuare un'analisi quantitativa.
RT-PCR (modalità di trascrizione inversa). Questo test viene utilizzato per cercare l'RNA a filamento singolo per rilevare virus la cui base genetica è l'RNA (ad esempio, virus dell'epatite C, virus dell'immunodeficienza). In questo studio viene utilizzato un enzima speciale: trascrittasi inversa e un primer specifico e un DNA a filamento singolo vengono costruiti sulla base dell'RNA. Quindi il secondo filamento di DNA viene recuperato da questo filamento e viene eseguita la procedura standard.

Indicazioni per il test

La procedura PCR viene utilizzata nella clinica di malattie infettive, neonatologia, ostetricia, pediatria, urologia, ginecologia, venereologia, neurologia, nefrologia e oftalmologia.

Indicazioni per il test:

determinare il rischio di sviluppare anomalie genetiche in un bambino con probabilità di patologie ereditarie;
diagnosticare entrambi i genitori quando si pianifica una gravidanza o in gravi condizioni madri durante la gravidanza in corso;
difficoltà con il concepimento, identificando le cause dell'infertilità;
sospetto di infezioni trasmesse sessualmente nella fase acuta e con sintomi della loro transizione verso la cronica;
individuazione delle cause di processi infiammatori di origine sconosciuta;
contatti sessuali occasionali e regolari non protetti;
determinare la sensibilità di un microrganismo patogeno a specifici antibiotici;
pazienti con sospetta infezione latente per rilevare gli agenti patogeni prima dello sviluppo di sintomi evidenti (diagnosi preclinica);
pazienti per confermare la guarigione dopo la malattia (diagnosi retrospettiva);:

La diagnostica viene utilizzata anche se è necessario identificare con precisione i seguenti agenti patogeni::

virus dell'epatite (A B C G), immunodeficienza umana, citomegalovirus;
Vibrio cholerae;
virus dell'herpes simplex, specie erpetiforme;
retro - adeno - e rinovirus;
virus della rosolia, di Epstein-Barr, della varicella (Zoster);
parvo e picornovirus;
batterio Helicobacter pylori;
Legionella, tipi patogeni di Escherichia coli;
Staphylococcus aureus;
agente patogeno;
clostridi, difterite e hemophilus influenzae;

Viene anche utilizzato per determinare le infezioni:

Mononucleosi infettiva;
borreliosi, listeriosi, encefalite trasmessa da zecche;
candidosi causata da funghi Candida;
infezioni trasmesse sessualmente – tricomoniasi, ureaplasmosi, treponema pallidum, gardnerellosi, gonorrea, micoplasmosi, clamidia;
tubercolosi.

Controindicazioni per

Poiché la procedura non viene eseguita con il paziente, senza alcun impatto sull'organismo, ma con materiale biologico prelevato per ricerca, non esistono controindicazioni alla PCR per l'assenza di potenziale pericolo.

Tuttavia, il biomateriale non viene raccolto dal canale cervicale dell’utero dopo la procedura di colposcopia. La presentazione di strisci e raschiamenti per l'analisi è consentita solo 4-6 giorni dopo la fine delle mestruazioni e la completa cessazione della dimissione.

Il metodo è sicuro?

Nessuno Influenza negativa su un paziente durante uno studio isolato del suo biomateriale in condizioni di laboratorio è impossibile.

Preparazione alla procedura (presentazione di sostanze biologiche per l'analisi)

Qualsiasi fluido biologico, tessuto o secrezione corporea funge da campione per l'analisi PCR, che rileva il DNA di un agente patogeno estraneo. La sostanza in esame viene assunta sotto forma di prelievo di sangue da una vena, raschiamento dalla laringe, cavità nasale, uretra, cavità pleurica, cervice.

Prima dell’iter diagnostico, il medico spiega al paziente quale materiale verrà raccolto:

Durante l'esame per le infezioni a trasmissione sessuale, vengono raccolte le secrezioni degli organi genitali, l'urina e uno striscio dall'uretra.
Quando si analizzano le infezioni erpetiche, vengono prelevati per l'analisi il citomegalovirus, la mononucleosi, l'urina e un tampone faringeo; per l'epatite, la toxoplasmosi, viene prelevato il sangue da una vena.
Per scopi diagnostici vari tipi Viene raccolto il liquido cerebrospinale.
In pneumologia, i campioni per l'analisi sono l'espettorato e il liquido pleurico.
Quando si conduce uno studio su possibili infezioni intrauterine durante la gravidanza, per l'analisi vengono utilizzati il liquido amniotico e le cellule placentari.

L'affidabilità e l'accuratezza dell'analisi dipendono dalla sterilità delle condizioni al momento del prelievo del materiale. Poiché il test PCR è altamente sensibile, qualsiasi contaminazione della sostanza in esame può distorcere il risultato.

Una preparazione competente per la consegna del biomateriale non presenta alcuna difficoltà per i pazienti. Ci sono alcune raccomandazioni:

durante l'analisi delle infezioni a trasmissione sessuale:
- escludere contatti intimi 72 ore prima dell'invio del materiale;
- smettere di usare qualsiasi prodotto vaginale 3 giorni prima;
- dalla sera del giorno precedente non effettuare l'igiene della zona esaminata;
- escludere la minzione 3-4 ore prima del prelievo di un campione dall'uretra;
interrompere l'assunzione di antibiotici un mese prima del test per le infezioni;
il sangue viene donato al mattino prima di mangiare e bere;
Il campione di urina del primo mattino viene raccolto in un contenitore sterile dopo un'accurata toilette intima.

Leggi di seguito come viene eseguita la diagnostica utilizzando il metodo della reazione a catena della polimerasi.

Come funziona la procedura?

Facendo Studi sulla PCR più e più volte nel reattore (amplificatore o termociclatore) si ripetono determinati cicli:

Il primo passo è la denaturazione. Saliva, sangue, materiale bioptico, campioni ginecologici, espettorato, in cui si sospetta la presenza di DNA (o RNA) di un agente patogeno, vengono posti in un amplificatore, dove il materiale viene riscaldato e il DNA viene diviso in due catene separate.
La seconda fase è la ricottura o un leggero raffreddamento del materiale e aggiungendovi primer in grado di riconoscere le regioni desiderate nella molecola di DNA e legarsi ad esse.
Il terzo passo è l'allungamento– si verifica dopo che 2 primer sono stati attaccati a ciascuno dei filamenti di DNA. Durante il processo, il frammento di DNA dell'agente patogeno viene completato e si forma la sua copia.

Questi cicli si ripetono come una “reazione a catena”, portando ogni volta al raddoppio delle copie di uno specifico frammento di DNA (ad esempio, il segmento in cui è programmato uno specifico virus). Nel giro di poche ore si formano molte copie del frammento di DNA e viene rilevata la loro presenza nel campione. Successivamente i risultati vengono analizzati e confrontati con i dati di un database di vari tipi di agenti patogeni per determinare il tipo di infezione.

Leggi di seguito sulla decodifica dei risultati e sulle conclusioni basate sulla reazione PCR.

Decodificare i risultati

Il risultato finale dello studio viene rilasciato 1 – 2 giorni dopo la presentazione del materiale biologico. Spesso - già il primo giorno dopo l'analisi.

Analisi qualitativa

Negativo il risultato significa che nella sostanza sottoposta al test non sono state trovate tracce di agenti infettivi.
Positivo il risultato significa il rilevamento di virus o batteri patogeni in un campione biologico con un altissimo grado di precisione al momento della presentazione del materiale.

Se il risultato è positivo, ma non vengono rilevati segni di aumento dell’infezione, questo stato del corpo viene chiamato “portamento sano” asintomatico. Si osserva più spesso quando si preleva biomateriale da un determinato luogo (canale cervicale, uretra, cavità orale) nelle malattie virali. In questo caso non è richiesto alcun trattamento, ma è necessaria una costante supervisione medica, poiché esiste la possibilità di:

diffusione del virus da portatori e infezione di persone sane;
attivazione del processo e transizione della malattia a una forma cronica.

Se però l'esame del sangue risulta positivo, ciò indica che l'infezione ha colpito l'organismo, e non si tratta più di uno stato di portatore, ma di una patologia che necessita di una terapia specifica immediata.

Analisi quantitativa

Il risultato quantitativo è determinato da uno specialista specifico per certo tipo infezioni. Sulla base di esso è possibile valutare il grado di sviluppo e lo stadio della malattia, il che consente di prescrivere tempestivamente il trattamento corretto.

costo medio

I prezzi per la reazione a catena della polimerasi sono determinati da: il tipo di ricerca, la difficoltà di identificare l'agente patogeno, la difficoltà di raccogliere materiale biologico, il tipo di analisi (qualitativa o quantitativa) e il livello dei prezzi in laboratorio.

D'altra parte, quando si studia la PCR, è possibile identificare più agenti patogeni contemporaneamente quando si raccoglie un tipo di materiale per l'analisi. Ciò ti consente di risparmiare su altri test di laboratorio.

Costo approssimativo dell'analisi PCR in rubli:

gonococco, gardnerella, trichomonas vaginalis – da 180
Chlamydia trachomatis – dal 190
papillomavirus – da 380 a 500
biocenosi del tratto urogenitale nella donna (valutazione quantitativa e qualitativa della microflora) – dall’800.

Ancora di più informazioni utili per quanto riguarda lo studio PCR è contenuto nel video qui sotto:

La reazione a catena della polimerasi è nota da 30 anni. È ampiamente utilizzato in molti campi, dall’archeologia alla genetica. È il metodo PCR che aiuta a stabilire la paternità, ma viene spesso utilizzato per identificare varie malattie infettive nel corpo umano. Cos'è l'analisi PCR?

Questa non è altro che un'imitazione del processo di riproduzione del DNA, a seguito del quale da un minuscolo frammento di una molecola di DNA si ottiene un numero enorme di molecole identiche per un periodo di tempo (di solito diverse ore), che può già essere studiato. Questo ti ricorda qualcosa? Molto simile alla clonazione. È la reazione a catena della polimerasi che è alla base della clonazione e viene utilizzata nella riproduzione dei tessuti in laboratorio. Ebbene, in medicina, l'analisi PCR viene utilizzata per identificare batteri (micoplasmi e agenti patogeni), virus (e papillomavirus), funghi (agenti patogeni) e protozoi (Trichomonas) nel corpo umano.

Questo metodo di diagnostica molecolare degli agenti patogeni infettivi è il più sensibile. Consentendo il rilevamento anche di un singolo frammento di DNA in un campione, il metodo PCR non ha praticamente limiti di sensibilità. E nella maggior parte dei casi, il risultato mostra una precisione del 100%, soprattutto quando si diagnosticano le infezioni batteriche. Non dà mai risultati falsi positivi.

È anche universale, poiché consente di identificare contemporaneamente più microrganismi in un campione, mentre vengono utilizzati metodi batteriologici diversi modi coltivazione per diversi gruppi di agenti patogeni. Inoltre, la PCR semplifica notevolmente il compito dei ricercatori, riducendo il tempo necessario per condurre il test a 24 ore e semplificando i requisiti per il trasporto dei campioni. Se il materiale per i metodi batteriologici e virologici deve essere vivo, per il metodo PCR è adatto tutto ciò che contiene DNA, anche le cellule morte.

L'analisi PCR per le infezioni è estremamente importante perché la maggior parte di esse, che colpiscono il corpo umano, si sviluppano in modo asintomatico o presentano sintomi simili. Ad esempio, il metodo PCR è ampiamente utilizzato per identificare le cause delle malattie del fegato, tra cui A, B, C, D, E, nonché il virus dell'herpes simplex. Per combattere ciascun virus, è necessario utilizzare tattiche terapeutiche completamente diverse. Pertanto, per prescrivere una terapia efficace, il medico deve identificare con precisione l'agente patogeno. E se si effettuano ricerche prolungate, l'infezione può diventare cronica, causando complicazioni particolarmente pericolose durante la gravidanza o altre malattie concomitanti. Ed è il metodo PCR l'assistente principale per una diagnosi rapida e accurata.

Ma qui è necessario capire che, essendo quasi l'unico metodo per identificare alcuni microrganismi (ad esempio il micoplasma), la PCR può essere del tutto inadatta per altri (stafilococchi, streptococchi, ecc.). Pertanto, uno specialista deve scegliere metodi diagnostici e prescrivere un trattamento . Non vale la pena andare in laboratorio da solo ed eseguire tutti i test di seguito. Potrebbero rivelarsi completamente inutili. E nelle cliniche private, su tua richiesta e per i tuoi soldi, eseguiranno per te eventuali test, senza nemmeno chiederti perché ne hai bisogno.

Come eseguire un test PCR

Per condurre studi PCR, vengono utilizzati fluidi e secrezioni biologici corpo umano, che può contenere microbi e i loro frammenti. Questi includono: sangue, saliva, espettorato e urina. Inoltre, vengono prelevati raschiati di cellule epiteliali della mucosa dell'uretra e del canale cervicale per l'analisi PCR. Ad esempio, per rilevare il virus dell’HIV e dell’epatite, viene prelevato il sangue da una vena. Per diagnosticare le infezioni genitali, vengono analizzate le secrezioni genitali e uno striscio dalla cervice o dall'uretra. Per diagnosticare la mononucleosi infettiva viene utilizzato un tampone faringeo.

Preparazione per l'analisi PCR

Prima di fare il test, dovresti consultare il tuo medico e seguire attentamente le sue raccomandazioni. Chiedi al medico quali materiali verranno presi per lo studio. Un esame del sangue PCR viene eseguito a stomaco vuoto. Ma prima di eseguire un test PCR sotto forma di raschiamento di cellule epiteliali, i medici raccomandano ai pazienti di bere birra la sera, andare allo stabilimento balneare e fare sesso. Sembra strano, ma tutto ciò attiva l'infezione dei genitali, che può manifestarsi in forma molto lieve, e aiuta a identificarla.

Decifrare l'analisi PCR

Il risultato del test PCR può essere positivo o negativo. Ciò è sempre annotato nel documento, che deve essere rilasciato dal laboratorio. Un risultato positivo significa che nel materiale biologico donato dal paziente è stato rilevato il DNA dell'infezione. Un risultato negativo significa che non è presente alcuna infezione nel corpo umano.

Poiché il metodo PCR è altamente sensibile, l'efficacia del trattamento dovrebbe essere monitorata con molta attenzione e solo diverse settimane dopo la terapia. Dopotutto, anche un frammento di DNA di un agente patogeno morto darà un risultato positivo al test PCR.

La reazione a catena della polimerasi aiuta i medici a diagnosticare le infezioni che si verificano nel corpo umano in forma latente, prevenendone lo sviluppo e gravi danni organi interni. Monitora attentamente la tua salute e al primo sospetto di un'infezione, consulta un medico.

Nella maggior parte dei casi, i pazienti devono affrontare una situazione in cui è necessaria la diagnostica PCR per esaminare o determinare la malattia. È importante capire di cosa si tratta e perché è necessario.

Il metodo della reazione a catena della polimerasi (PCR) è un test che aiuta a identificare molte malattie in fasi iniziali sviluppo. La sua essenza è trovare il DNA o l'RNA dell'agente patogeno presente nel corpo. La PCR consente di determinare l'agente patogeno nei casi in cui altri tipi di ricerca sono inefficaci.

Popolarità questo metodoè semplicità e ampiezza di utilizzo. Viene utilizzato dai medici per diagnosticare varie malattie. Consente di condurre rapidamente studi quantitativi e genomici complessi.

Una delle applicazioni mediche più importanti del metodo PCR classico è la rilevazione di microrganismi in grado di causare condizioni patologiche.

L'essenza dell'analisi PCR

La diagnostica PCR (cos'è lo spiega la biologia molecolare) è un metodo di clonazione molecolare utilizzato per analizzare una breve sequenza di DNA presente in quantità minime in campioni contenenti qualsiasi materiale genetico. Questo metodo è spesso chiamato "macchina fotocopiatrice del DNA".

La diagnostica PCR viene eseguita in vitro (fuori dal corpo) in laboratorio e si basa sul processo naturale di raddoppiamento del DNA prima che si divida. Oltre alla capacità di rilevare virus, batteri o altri microrganismi in un campione, la PCR consente di identificarne la quantità.

Per malattie come il virus dell’epatite C o il virus dell’immunodeficienza umana (HIV), la carica virale è un buon indicatore della localizzazione della malattia e dell’efficacia della terapia.

Armati di queste informazioni, i medici possono determinare quando iniziare il trattamento e monitorare il processo. Questo ci permette di creare un approccio individuale per ciascun paziente.

La diagnostica PCR comprende tre fasi, in ciascuna delle quali la quantità di DNA bersaglio aumenta in modo significativo. Come risultato di questa reazione si ottengono più di un miliardo di copie del DNA originale o “bersaglio”, il che consente di valutare la presenza del virus nell’organismo. Questa è la proprietà principale del metodo PCR.

Vantaggi e svantaggi del metodo

La diagnostica PCR (di cosa si tratta è descritta sopra) è stata descritta in dettaglio da Keri Mullis nel 1983. Da allora, il metodo è stato estremamente popolare nella pratica di laboratorio.

I principali vantaggi di questo tipo di ricerca sono:

versatilità;
velocità dei risultati;
alta probabilità di ottenere risultati affidabili;
specificità;
varietà di malattie che possono essere identificate.

La versatilità del metodo PCR risiede nella possibilità di utilizzare qualsiasi materiale fisiologico umano. Anche un capello è sufficiente per l'analisi.

Il processo di elaborazione dei dati, grazie all'automazione, può richiedere diverse ore. La specificità consiste nell'isolamento di un determinato frammento di DNA caratteristico di un particolare agente patogeno. Utilizzando l'analisi PCR è possibile diagnosticare molte malattie, sia nella fase acuta che in quella latente.

Ma, nonostante l’enorme numero di vantaggi, il metodo diagnostico PCR presenta anche degli svantaggi:

probabilità di risultati falsi positivi;
alta sensibilità;
variabilità dei microrganismi.

Lo svantaggio principale del metodo è l’incapacità della PCR di distinguere i microrganismi vivi da quelli morti. Di norma si tratta di una situazione in cui è necessario valutare il successo del trattamento. In questo caso, se la malattia è stata curata, le cellule morte rimangono nel corpo umano per qualche tempo e ci vuole un tempo dalle 4 alle 6 settimane per il suo completo rinnovamento.

L'elevata sensibilità è un vantaggio e allo stesso tempo uno svantaggio. Alcuni microrganismi sono presenti in piccole quantità nel corpo. Pertanto, in questo caso, questo metodo diagnostico non è informativo e si consiglia di utilizzare altri tipi di ricerca.

Qualsiasi microrganismo può mutare. E anche se il processo di amplificazione utilizza un frammento specifico meno suscettibile ai cambiamenti, può comunque acquisire mutazioni e diventare invisibile al sistema di test. Questa situazione spiega il fatto che diversi sistemi di analisi di laboratorio possono mostrare risultati completamente diversi.

In quali ambiti viene utilizzato il metodo?

Il test PCR può essere utilizzato nella pratica clinica per identificare varie malattie. Ampiamente usato in ginecologia, urologia, gastroenterologia, oncologia, ecc. Inoltre, è efficacemente utilizzato nelle scienze forensi per stabilire l'identità e stabilire la paternità.

Questo tipo di studio viene utilizzato nella fase di pianificazione e durante la gravidanza. L’analisi per le infezioni TORCH viene effettuata per rilevare la presenza di infezione nel corpo di una donna. Le malattie causate da una delle infezioni possono essere lievi per una donna, ma causare gravi difetti congeniti nel feto, inclusa la sua morte.

Inoltre, il metodo diagnostico PCR aiuta a determinare la predisposizione genetica di una persona allo sviluppo futuro di determinate malattie.

Quali infezioni possono essere rilevate dalla diagnostica PCR?

Il metodo PCR aiuta a identificare virus, batteri e funghi.

Le malattie più comuni che possono essere diagnosticate utilizzandolo:

Quali materiali biologici vengono studiati?

Tenendo conto della malattia, dei sintomi e degli obiettivi dello studio, la diagnostica PCR può utilizzare qualsiasi fluido fisiologico o particella di tessuto.

Potrebbe essere:

sangue;
saliva;
espettorato;
urina;
escrementi;
tampone orofaringeo;
un pezzo di tessuto interessato;
liquido sinoviale;
raschiamento dalla vagina nelle donne o dall'uretra negli uomini;
eiaculare;
capelli e altri.

Per le malattie del sistema genito-urinario, viene prelevata l'urina o uno striscio dalla vagina nelle donne o dall'uretra negli uomini. Il sangue venoso viene donato per la diagnosi di malattie come l'HIV, l'epatite vari tipi, infezioni TORCIA.

Per escludere o confermare l'oncologia, durante gli interventi chirurgici vengono rimossi pezzi di tessuto per la biopsia.

Come prepararsi per l'analisi

Le caratteristiche della preparazione alla ricerca dipendono dal biomateriale presentato. Dovresti anche ricordare che è necessario evitare l'assunzione di antibiotici e altri farmaci. Per monitorare l'efficacia del trattamento, è necessario mantenere un intervallo dopo l'assunzione dei farmaci per almeno 4 settimane.

Il sangue viene donato al mattino a stomaco vuoto. L'urina e le feci devono essere collocate in un contenitore apposito, completamente sterile. Allo stesso tempo, prima di raccogliere l'urina, è necessario effettuare l'igiene dei genitali esterni.

Se devi sottoporti a un pap-test, devi:

non urinare per 3 ore;
Non è consigliabile lavarsi e fare la doccia il giorno prima (per le donne);
interrompere l'attività sessuale un giorno prima;
Le donne dovrebbero sottoporsi a un pap test a metà ciclo.

Fasi della ricerca sulla PCR

Prima di iniziare la PCR, il DNA deve essere estratto dal campione. L'estrazione del DNA è un processo in più fasi che può essere eseguito manualmente o strumentalmente.

Una volta preparato il campione, inizia il processo PCR in tre fasi:

separazione del DNA bersaglio (denaturazione);
amplificazione (riproduzione) di frammenti di DNA;
rilevamento (rilevamento) di frammenti di DNA amplificati.

La prima fase della PCR è chiamata denaturazione. La sua essenza è che una provetta con campioni di DNA viene riscaldata alte temperature(circa 90 gradi). A causa delle alte temperature, i legami deboli tra i nucleotidi che formano il codice delle molecole vengono distrutti. Ciò si traduce nella divisione del DNA o RNA a doppio filamento in due filamenti separati.

Per la "purezza" dello studio, al biomateriale in studio viene aggiunta una soluzione speciale, che dissolve le sostanze organiche. La durata di questa fase dipende dal tipo di materiale da testare e dall'agente infettivo.

La diagnostica PCR (di cosa si tratta è descritta sopra) nella seconda fase riproduce frammenti di DNA basati sul DNA dell'infezione stessa. La PCR non copia tutto l'acido nucleico in un campione. Copia solo una sequenza speciale codice genetico, breve frammento (primer).

Nella seconda fase, la provetta viene raffreddata. L'intero processo PCR è automatizzato utilizzando una macchina chiamata termostato o termociclatore e può essere completato in poche ore. La macchina PCR è programmata per modificare la temperatura della miscela di reazione ogni pochi minuti. Ciò si verifica in modo che i frammenti corti possano legarsi al modello a filamento singolo.

L'amplificazione avviene in 30-40 cicli. Durante questo periodo, il medico di laboratorio copia il frammento di DNA e ne aumenta la quantità utilizzando il metodo della reazione a catena. Pertanto, ad ogni ciclo, il numero di copie aumenta fino a diversi milioni o addirittura miliardi.

Nella terza fase dello studio viene rilevata la presenza del DNA di virus e batteri. Questo viene fatto distribuendo la miscela risultante e aggiungendovi una soluzione speciale. Questo liquido consente ai frammenti di DNA di acquisire un certo colore sotto l'influenza dei raggi ultravioletti. Questo è un indicatore della presenza di microbi patogeni nel corpo umano.

PCR durante la gravidanza

La diagnostica PCR (di cosa si tratta è descritta sopra) può essere prescritta per la prima volta durante la gravidanza, poiché è una procedura obbligatoria. Questo metodo aiuta a identificare le infezioni nascoste e il rischio di sviluppare difetti nel feto.

Per effettuare l'analisi utilizzare:

Esistono malattie infettive che possono influenzare negativamente lo sviluppo del feto, causando difetti, causando parto prematuro e aborti spontanei. Sono particolarmente pericolosi nel primo trimestre di gravidanza e, nella maggior parte dei casi, costituiscono un'indicazione medica per l'interruzione della gravidanza. Queste infezioni sono collettivamente chiamate complesso TORCH.

L'analisi PCR aiuta a determinare la presenza o l'assenza di infezione nel corpo di una donna incinta. Spesso eseguito nella fase di pianificazione della gravidanza o nel primo trimestre. Se il risultato è positivo, è necessario ripetere il test. E solo dopo la conferma dei risultati viene prescritto un trattamento appropriato.

PCR per la diagnosi dell'HIV

Il metodo PCR per diagnosticare l'infezione da HIV è un test costoso e viene utilizzato secondo indicazioni particolari. Questi includono la donazione e può anche essere prescritto a pazienti feriti in un incidente stradale con persone portatrici di HIV.

La PCR aiuta a determinare la presenza di infezione fasi iniziali prima che il corpo produca anticorpi contro l’HIV. Risultato con percentuale elevata Lo studio può mostrare la probabilità entro 5-14 giorni dall’ingresso del virus.

In altri casi, la presenza di un virus nel corpo umano aiuta a stabilire un test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA). Rileva gli anticorpi contro l’HIV nel sangue di una persona, che iniziano a essere prodotti 1-3 mesi dopo l’infezione. La determinazione quantitativa e l'analisi dei microrganismi sono necessarie per monitorare il trattamento dei pazienti.

PCR per la diagnosi dell'epatite

L'epatite virale C è una malattia grave che può portare allo sviluppo della cirrosi epatica. Durante il periodo di incubazione, che può durare fino a 12 mesi, il virus non si manifesta in alcun modo, il paziente non è praticamente contagioso e il virus non può essere rilevato mediante un esame del sangue di routine.

Molto spesso, se non trattata tempestivamente, la malattia diventa cronica e minaccia di molteplici complicazioni.

In caso di infezione da epatite B, il periodo di incubazione non è così lungo e i primi sintomi possono essere osservati dopo 4 settimane. È durante questo periodo che l'ELISA può mostrare la presenza del virus nel corpo.

Il metodo PCR consente:

identificare la malattia nella fase di sviluppo dell'incubazione;
risolvere analisi discutibili di altri studi;
valutare l’efficacia della terapia antivirale.

L'assenza del virus del DNA dell'epatite dopo il trattamento è un segno della sua efficacia.

Test per la tubercolosi

Lo sviluppo della tubercolosi è provocato dal bacillo di Koch, che può entrare nel corpo umano attraverso goccioline trasportate dall'aria. La malattia ha due forme: nascosta e aperta. Nel primo caso la persona infetta non è portatrice dell'infezione e i micobatteri nell'espettorato non vengono rilevati nemmeno utilizzando la PCR. Questa forma è ancora pericolosa perché è in grado di entrare nella fase aperta.

La fase aperta (attiva) rappresenta un pericolo per gli altri anche se le regole di igiene personale vengono rigorosamente osservate. La fluorografia, la tomografia e i raggi X vengono utilizzati per diagnosticare la malattia. Petto. Anche a questo scopo viene utilizzato un test cutaneo tubercolato (test di Mantoux). Ma la maggior parte metodo efficace la ricerca è la PCR.

Come campioni di prova vengono utilizzati i seguenti campioni:

sangue;
espettorato;
liquido bronchiale.

PCR per la diagnosi dell'HPV

La diagnosi dell'HPV viene effettuata in presenza di sintomi della malattia come papillomi e verruche nella zona genitale. Inoltre, lo studio è prescritto nella fase di pianificazione della gravidanza, in caso di infertilità, aborto spontaneo, nonché in caso di infezione di uno dei partner, poiché uno dei meccanismi di trasmissione del virus è sessuale.

La cosa più pericolosa non è la presenza del virus nell’organismo, ma la sua tipologia. Alcuni dei suoi tipi (16 e 18) sono altamente oncogeni e possono causare il cancro cervicale nelle donne. Il metodo PCR può essere prescritto insieme ad altri tipi di ricerca. Per l'analisi, viene spesso utilizzato uno striscio dagli organi genitali. Sangue, urina e secrezioni vaginali vengono utilizzati molto raramente come biomateriali.

Per l'herpes

Questo test diagnostica l'infezione genitale da virus dell'herpes simplex di tipo 1 e 2 (HSV1/HSV2). Se il risultato dell'HSV2 è positivo, dovresti sottoporti al test per l'HIV e altre malattie sessualmente trasmissibili. L'analisi richiede il sangue venoso del paziente.
Se sono presenti sintomi, è possibile esaminare anche l'urina, le secrezioni e il contenuto dell'eruzione cutanea.

Esame PCR completo

Se indicato, o allo scopo di prevenire la malattia, può essere prescritta una serie di test PCR. Molto spesso, l'iniziatore è il paziente stesso, ci sono casi in cui viene prescritto un esame completo per prevenire l'insorgenza di alcune malattie in una particolare regione.

PCR-12 è uno studio completo che copre le seguenti infezioni:

Epatite.
Herpes.
ST.
Tubercolosi.
Encefalite.
Candidosi.
Infezione da Helicobacter pylori.
Citomegalovirus.
Mononucleosi.
Oncovirus.
Listeriosi.

Spiegazione dell'analisi PCR

Dopo l'analisi con il metodo PCR è possibile annunciare un risultato positivo o negativo.

I risultati della diagnostica PCR appaiono così. Il medico ti dirà di cosa si tratta e come decifrarlo

Accuratezza della diagnostica PCR

Nella maggior parte dei casi, la diagnostica PCR fornisce risultati altamente accurati. Ma in alcuni casi sono necessari ulteriori metodi di ricerca per confermare la diagnosi corretta.

Cosa potrebbe causare un risultato falso?

Risultati falsi positivi possono derivare dal mancato rispetto delle regole per la raccolta delle analisi e la conduzione della procedura di ricerca stessa.

Il paziente stesso può essere il colpevole di false informazioni in caso di preparazione inadeguata per la consegna del biomateriale. L'attrezzatura del laboratorio e la professionalità del medico possono influenzare direttamente i risultati dello studio.

Dove ottenere la diagnostica PCR

La diagnostica PCR viene eseguita in cliniche e laboratori privati su prescrizione del medico o su iniziativa del paziente stesso a scopo di prevenzione.
La preferenza dovrebbe essere data a cliniche e laboratori con attrezzature moderne che sono presenti sul mercato medico da diversi anni e si sono dimostrate efficaci.

Analisi PCR: costi e tempistiche

Questo metodo diagnostico è costoso. Il suo prezzo varia da 200 a 500 rubli per ogni tipo. Un esame completo per la presenza di più infezioni può far risparmiare notevolmente rispetto al pagamento di ogni singolo esame.

La durata dello studio dipende dal tipo di infezione e può richiedere da 1 a 5 giorni. Inoltre, questi indicatori dipendono dall'attrezzatura del laboratorio e dalle qualifiche dell'operatore sanitario.

La diagnostica PCR (di cosa si tratta è descritta in dettaglio in questo articolo) è il metodo di ricerca più accurato e veloce. È una delle scoperte più importanti del XX secolo. in medicina.

Grazie a questo metodo è diventata possibile la cura completa di molte malattie. Ma non dobbiamo dimenticare che la PCR presenta anche alcuni svantaggi e la sua efficacia talvolta aumenta insieme all’uso di altri metodi di ricerca.

Formato articolo: Vladimir il Grande

Video sulla diagnostica PCR

Informazioni sull'accuratezza della PCR:

IN medicina moderna L'analisi PCR dei fluidi biologici del corpo è estremamente accurata e informativa. Utilizzando questa analisi, viene rilevata la presenza di particelle virali e microbiche nel corpo, anche se la malattia è nascosta e non dà alcun sintomo.

Cosa significa prescriverti un test PCR? Questa abbreviazione sta per metodo di reazione a catena della polimerasi - questo è un modo speciale di esecuzione ricerca di laboratorio. Con questo metodo il materiale biologico ottenuto dal paziente viene inserito in un apposito apparecchio. Al mezzo di prova viene aggiunta una serie di enzimi reagenti che aiutano a riprodurre il materiale genetico dell'agente patogeno (virus o microbo). La reazione produce un gran numero di copie di DNA o RNA, consentendo l'identificazione mediante confronto con un database di infezioni virali e microbiche.

Cosa significa il risultato del test PCR? Se nel corpo umano è presente l'agente causale di qualsiasi infezione, anche nascosto, questa analisi rivelerà non solo la sua presenza, ma anche la quantità di questa infezione presente nel corpo.

Per testare le infezioni utilizzando il metodo PCR, puoi esaminare tutti i fluidi biologici del corpo: sangue, urina, saliva, secrezioni genitali, muco della gola e del naso. L'analisi richiede pochissimo materiale, poiché se sono presenti agenti patogeni, riproducendo le loro copie, la concentrazione dell'informazione genetica viene portata a un livello tale da identificare il microbo o virus e determinarne il tipo. L'accuratezza dell'analisi PCR è molto elevata; con l'aiuto di questa analisi oggi è possibile determinare quasi tutte le infezioni virali, microbiche e di altro tipo diffuse.

Ma cosa rivela più spesso l’analisi PCR? L'elenco delle infezioni che possono essere rilevate con questo metodo comprende infezioni infettive, comprese infezioni socialmente pericolose come la tubercolosi o l'epatite B e C. Lo stesso metodo può rilevare l'infezione da HIV, infezioni da clamidia e ureaplasma, micoplasmosi sia del sistema respiratorio che genitale Utilizzando questa analisi, vengono rilevati mughetto, vaginosi batterica e tricomoniasi. Le capacità di questo metodo consentono di identificare infezioni nascoste - diversi tipi di herpes, HPV (papillomavirus), nonché di identificare un microbo speciale responsabile dello sviluppo di ulcere allo stomaco - Helicobatera.

Oggi è possibile eseguire un test PCR in quasi tutti i laboratori privati o pubblici. Questi tipi di test vengono eseguiti su tutti, bambini e adulti. A seconda dello scopo dell'analisi, viene analizzato materiale biologico diverso a seconda del sesso.

Pertanto, l'analisi PCR negli uomini viene eseguita su sangue o urina, secrezioni uretrali, muco della gola o del naso, succo della prostata o persino sperma. L'analisi PCR nelle donne è possibile nel sangue e nelle urine, nelle secrezioni vaginali, nelle secrezioni uretrali, nel muco nasale e faringeo.

L'analisi PCR viene utilizzata molto spesso durante la gravidanza; con il suo aiuto vengono rilevate infezioni nascoste nelle secrezioni vaginali o nel sangue, che richiedono un monitoraggio speciale durante questo periodo e talvolta un trattamento adeguato.

Come viene eseguita la PCR?

Un test di infezione con questo metodo è prescritto da un medico; spesso il materiale viene raccolto immediatamente nello studio del medico - un urologo o un ginecologo. Come viene eseguita l'analisi PCR?

Il materiale studiato viene miscelato con i reagenti in laboratorio e si attende la reazione. Quando sono presenti agenti patogeni, le copie del loro DNA o RNA si moltiplicano. Il dispositivo confronta i frammenti identificati di materiale genetico con i database e identifica accuratamente l'agente infettivo. Se necessario viene indicata anche la quantità dell'agente patogeno presente in alcuni fluidi corporei. In genere, lo studio dura non più di 1-2 giorni, se necessario vengono eseguiti test rapidi.

Da dove ottieni l'analisi PCR? Ciò dipenderà da quali tipi di agenti patogeni si sospettano. Se si tratta di HIV o epatite, viene prelevato del sangue, se si tratta di infezioni a trasmissione sessuale, viene prelevato uno striscio dall'uretra o dalla vagina. Se si sospetta la mononucleosi o l'herpes, viene effettuato un tampone faringeo. Possono essere utilizzati anche urina, liquido cerebrospinale, secrezione di ferite, espettorato, ecc.

Analisi del sangue PCR

Per risultati accurati e diagnosi di infezioni, è importante donare il sangue ore del mattino a stomaco vuoto. Un esame del sangue mediante PCR può identificare gli agenti patogeni malattie pericolose- HIV, epatite, sifilide. Durante i periodi di esacerbazione e attività del virus, nel sangue possono essere rilevati virus dell'herpes, papillomi e alcuni altri.

Analisi PCR: preparazione

Per l'assoluta accuratezza dell'analisi, è importante una preparazione adeguata. Il modo più semplice per prepararsi a un esame del sangue è che non ci siano restrizioni sulla dieta o sull'attività; il sangue deve essere prelevato al mattino, a stomaco vuoto. Dopo aver lavato i genitali, viene effettuato un esame delle urine, dalla parte centrale in uno speciale contenitore sterile. Merita l'analisi PCR del tratto genitale attenzione speciale, quindi è importante sapere come prepararsi. Un giorno prima dell'esame è vietato fare sesso; si raccomanda di non urinare prima dell'esame. Durante le mestruazioni nelle donne, la data dell'analisi viene posticipata di 3-5 giorni dal momento dell'ultima dimissione.

Quanto tempo ci vuole per eseguire un test PCR?

A seconda delle capacità del laboratorio, l’analisi può essere preparata da alcune ore a diversi giorni. In media, quanti giorni dura un test PCR? Di solito sono uno o due giorni. A situazione di emergenza l'analisi può essere effettuata lo stesso giorno, in poche ore.