PCR analýza pre 5 infekcií. PCR analýza je najpresnejším testom na infekcie. Metóda PCR umožňuje

Pre úspešnú liečbu najviac dôležitý bod je rýchla a bezchybná diagnostika. IN V poslednej dobe Zoznam metód a možností diagnostických centier, kliník a nemocníc v oblasti diagnostiky sa neustále rozširuje. Po nástupe relatívne novej techniky - analýzy PCR, si táto metóda rýchlo získala prívržencov medzi zdravotníkmi, pretože je často nevyhnutná pri identifikácii infekčných chorôb.

Rozsah použitia metódy založenej na polymerázovej reťazovej reakcii nie je obmedzený len na medicínu, ale PCR diagnostika sa stala najrozšírenejšou na identifikáciu rôznych chorôb.

Medzi nepopierateľné výhody PCR patria:

Veľmi vysoká citlivosť. Väčšinou sa hovorí o citlivosti od 95 do 100 %, ide však o priemerné údaje. Tento indikátor sa líši pre rôzne mikroorganizmy. Takže pri hepatitíde C nie je nikdy nižšia ako 97% (za predpokladu, že sú splnené všetky požiadavky) a na stanovenie ureaplazmózy - nie menej ako 99%. Táto citlivosť je v súčasnosti najvyššia, takže metóda nemá z hľadiska tejto charakteristiky takmer žiadnych konkurentov.
Možnosť použitia v najskorších štádiách. V čase, keď iné diagnostické metódy ešte nedokážu identifikovať patogén pre jeho malé množstvo vo vzorke, PCR už prináša správny výsledok. Prítomnosť patogénu možno zistiť aj v prítomnosti jedinej vzorky a v niektorých prípadoch iba fragmentu mikróbu. Z tohto dôvodu sa metóda používa aj pri chronických alebo latentných patológiách, ako aj v štádiu inkubácie.
Široká škála výsledkov. Analýza je schopná identifikovať niekoľko patogénov súčasne, čo si nevyžaduje opakované manipulácie. Niekedy sa podarí nájsť patogény, s ktorými sa pri prvotnej diagnostike ani nepočítalo.
Všestrannosť vzoriek. Vzorka môže zahŕňať vzorky krvi, slín, spúta, vlasov, vaginálneho výtoku a buniek rôznych tkanív.
Rýchlosť dosiahnutia výsledkov. Vo väčšine prípadov je odpoveď prijatá do 5-6 hodín. Pre kultivačný test, ktorý sa z hľadiska presnosti blíži k polymerázovej reťazovej reakcii, možno rovnaký výsledok získať za niekoľko dní až niekoľko týždňov.
Kvantitatívne stanovenie patogénu. Tento parameter umožňuje určiť titer mikróbov v materiáli a táto vlastnosť je často potrebná na posúdenie účinnosti zvolenej taktiky liečby.
Identifikácia samotného mikroorganizmu namiesto určovania jeho reakcií. Väčšina analýz je založená na reakcii patogénu na chemické činidlá, farbenie atď. Táto diagnostická metóda vám umožňuje zistiť mikrób priamo, a nie nepriame príznaky, protilátky atď.

Napriek takémuto širokému zoznamu výhod má metóda aj niektoré nevýhody:

Môže dôjsť k falošnej detekcii mikroorganizmov v dôsledku kontaminácie vzorky z predchádzajúcej vzorky. K tomu dochádza, keď sú nástroje alebo činidlá zahrnuté do analýzy kontaminované. Dokonca aj vo vzduchu sú úlomky mikróbov, ktoré môžu ovplyvniť výsledky, takže v takýchto laboratóriách musí byť nainštalovaný biologický filter s maximálnym stupňom čistenia vzduchu.
Falošne negatívny výsledok. Dokonca aj so všetkými zjavnými prejavmi choroby sa niekedy získajú negatívne údaje. Dôvodom je nesprávne miesto odberu vzorky, preto musí mať laboratórny personál dostatočnú kvalifikáciu, znalosti a skúsenosti.
Údaje by mal posudzovať výlučne ošetrujúci lekár, pretože interpretácia výsledkov analýzy PCR je zložitý proces. Pozitívna odpoveď nemusí vždy znamenať chorobu. Faktom je, že po úspešnom liečení choroby sú fragmenty patogénu prítomné v krvi dlhú dobu, takže záver môže urobiť len veľmi kvalifikovaný odborník.
Vysoké náklady na diagnostiku pomocou polymerázovej reťazovej reakcie. Cena je spôsobená drahým prístrojovým vybavením a vysokými požiadavkami na laboratórne podmienky a kvalifikáciu personálu.

Povinné podmienky na získanie presných údajov v laboratóriách PCR:

správny mechanizmus odberu vzoriek a ich správny transport do laboratória;
prísne dodržiavanie metód počas analýzy;
vysoká sterilita a maximálna automatizácia procesu;
používanie jednorazových nástrojov;
vnútorný laboratórny kontrolný systém na potvrdenie spoľahlivosti údajov.

Za predpokladu, že sú splnené všetky požiadavky, na základe údajov získaných technikou PCR je možné ochorenie nielen určiť, ale aj predpovedať jeho priebeh a vytvoriť liečebný algoritmus.

Podstata metódy

Polymerázová reťazová reakcia umožňuje rýchlo skopírovať a reprodukovať reťazce DNA mikróbov, ktoré ochorenie spôsobili. Aby proces prebiehal rýchlo, používajú sa špeciálne enzýmové prípravky, ktoré urýchľujú replikáciu a stavbu reťazca nukleotidov.

Po ukončení procedúry sa prítomnosť patogénu vo vzorke miliónkrát zvýši, potom už nie je problém s jeho detekciou a identifikáciou.

Laborant môže porovnať výslednú vzorku so vzorkou prezentovanou v databáze a presne ju pomenovať, ako aj určiť jej pôvodné množstvo.

Okrem toho vám táto technika umožňuje klonovať jednotlivé úseky reťazca DNA, spôsobiť v nich potrebné mutácie a navzájom kombinovať a kombinovať úseky.

Oblasti použitia

V medicíne sa najčastejšie používa PCR diagnostika. S jeho pomocou môžete identifikovať vírusové, infekčné, dedičné ochorenia, a to nielen v aktívnej fáze, ale aj bezprostredne po infekcii.

Oblasti medicíny, v ktorých sa metóda PCR aktívne používa na diagnostiku:

urológia a gynekológia - na detekciu väčšiny pohlavne prenosných chorôb (ureaplazmóza, herpes, syfilis, kvapavka, gardnerelóza, trichomoniáza, chlamýdie, HIV, mykoplazmóza, ľudský papilomavírus, kandidóza atď.);
pulmonológia - na tuberkulózu alebo pneumóniu bakteriálnej alebo vírusovej povahy;
gastroenterológia - na helikobakteriózu;
v hematológii - s cytomegalovírusom, rôznymi krvnými onkovírusmi;
v oblasti infekčných chorôb - na zistenie záškrtu, salmonelózy, mononukleózy, listeriózy, hepatitídy vírusového pôvodu, encefalitídy;
v onkológii - určiť rakovinu prsníka, leukémiu, lymfóm.

Táto metóda sa využíva aj v neonatológii, pediatrii, oftalmológii, neurológii – takmer v každom odvetví medicíny sa ukázala ako nevyhnutná.

Video podrobne popisuje, ktoré infekcie je možné zistiť pomocou polymerázovej reťazovej reakcie.

Väčšina pohlavne prenosných chorôb je rýchlo a úspešne diagnostikovaná vďaka PCR diagnostike. Okrem identifikácie patogénu vám táto metóda umožňuje zistiť špecifický kmeň mikroorganizmu, čo umožňuje vybrať najefektívnejší liek na liečbu.

Okrem medicíny sa metóda PCR používa aj v iných oblastiach:

Súdne lekárstvo a súdne lekárstvo – pomáha identifikovať zločinca porovnaním genetického materiálu podozrivého so vzorkami nájdenými na mieste činu.
Stanovenie otcovstva – porovnávajú sa znásobené genetické súbory rodiča a dieťaťa, nachádzajú sa identické fragmenty, na základe ktorých sa dá usúdiť miera ich príbuznosti.
Veda používa metodológiu počas experimentov pomocou génové mutácie, stanovenie vzťahu evolučných vetiev jednotlivých organizmov a pod.

PCR diagnostika vo venerológii

Mnoho infekcií, ktoré spôsobujú pohlavné choroby, v počiatočných štádiách sú veľmi podobné v prejavoch a symptómoch, takže je dosť ťažké ich odlíšiť. Včasná identifikácia infekčného agens zároveň umožňuje začať liečbu čo najskôr a dobu liečby skrátiť na minimum, čím sa zabráni rozvoju možných komplikácií.

Polymerázová reťazová reakcia je účinný mechanizmus na identifikáciu nasledujúcich skupín pohlavných chorôb:

bakteriálne infekcie (syfilis, donovanóza, kvapavka, chlamýdie atď.);
vírusové patológie (papilomatóza, kondylomatóza, HIV, genitálny herpes atď.);
plesne (drozd, balanopostitída atď.)

V dermatovenerológii je obzvlášť užitočná vlastnosť tejto techniky nájsť infekčné agens počas obdobia remisie alebo počas prepravy, keď človek môže infikovať partnerov bez príznakov ochorenia.

Priebeh analýzy polymerázovej reťazovej reakcie

PCR analýza prebieha v 4 hlavných fázach:

príprava materiálu na kopírovanie;
kombinovanie DNA fragmentu a primeru;
kopírovanie genetického súboru študovaného materiálu;
identifikáciu a vyhodnotenie výsledného súboru DNA.

1. fáza

Vzorka sa zahrieva na teplotu 94-98°C v špeciálnom zariadení - termocykleri, ktorý je naprogramovaný na udržiavanie presných teplôt s nízkou chybou. Nastavená teplota sa udržiava minútu alebo dve. To je nevyhnutné na denaturáciu DNA, aby sa dvojitá špirála rozdelila na dve samostatné vlákna.

2. fáza

Teplota v termocykléri sa zníži na 72-75°C, aby primér mohol rozpoznať jemu podobný úsek DNA reťazca a spojiť sa s ním.

Primery sú špeciálne činidlá, ktoré sú vhodné len pre jeden typ patogénu. Ak je potrebné analyzovať niekoľko patogénov, potom sa do vzorky pridá požadovaný počet primerov.

V tomto štádiu DNA replikuje svoj templát pomocou priméru.

Laboratórne možnosti sú obmedzené dostupnosťou primerov pre špecifické mikroorganizmy, takže rozsah možností je určený dostupnosťou takýchto vzoriek.

3. fáza

V tomto segmente dochádza k zvýšeniu genetického materiálu patogénu. Enzým sa približuje k priméru s templátom a reprodukuje nový reťazec DNA identický s reťazcom obsiahnutým v pôvodnom reťazci.

Po dokončení syntézy sa dokončí jeden úplný cyklus polymerázovej reťazovej reakcie. Časovo to trvá v priemere do 3 minút. Počas tejto doby sa materiál zdvojnásobí. Ďalšie zvýšenie počtu reťazcov nastáva geometrickým postupom a na konci analýzy bolo dokončených 50-80 cyklov.

4. fáza

Štádium, ktoré si vyžaduje pozornosť a osobitnú starostlivosť zo strany personálu.

Stanovenie mikroorganizmu sa uskutočňuje pomocou elektroforézy alebo farbenia. Pri elektroforéze je určujúcim faktorom dĺžka fragmentov DNA a pri použití značiek vývoj farby počas enzymatickej reakcie.

Typy testov PCR

Existuje mnoho variácií takejto PCR diagnostiky. Výber konkrétnej metódy závisí od mnohých faktorov: predpokladaná diagnóza, možnosti dostupných laboratórií, spôsob odberu materiálu atď.

Najbežnejšie používané typy PCR sú:

vnorené;
stupňovitý;
s horúcim štartom;
virtuálne;
asymetrické;
v reálnom čase atď.

Prevažne sa používa real-time PCR, keďže metóda sa vyznačuje najpresnejšími výsledkami a maximálnou rýchlosťou spracovania dát. Po jeho použití je záver hotový za hodinu až dve.

Metóda je široko používaná v pediatrii na detekciu vírusov a krvných infekcií, genetických chorôb a infekcií TORCH. Neonatológovia predpisujú takúto diagnostiku v problematických prípadoch doslova od prvých dní života. Niekedy takáto diagnostika umožňuje odhaliť infekciu vnútromaternicových tekutín, ktoré predstavujú nebezpečenstvo pre vývoj plodu počas obdobia aktívnej tvorby.

Ak lekár vydá odporúčanie na vyšetrenie pomocou polymerázovej reťazovej reakcie, potom musí objasniť, aký druh biomateriálu je potrebné poskytnúť pacientovi a ako sa pripraviť na odber vzorky.

Rozbor krvi

Krv sa odoberá ako biomateriál na testovanie v prípade podozrenia na HIV, vírusovú hepatitídu, toxoplazmu, genitálny herpes a cytomegáliu. U väčšiny týchto patogénov bola pred použitím tejto metódy diagnostika založená na detekcii protilátok proti patogénu, čo značne oneskorilo čas detekcie mikróbov v období, keď ešte protilátky neboli vytvorené.

Pred darovaním krvi na diagnostiku v tomto prípade nie sú potrebné žiadne špeciálne prípravky, ale je lepšie, ak sa vzorka odoberie nalačno. Jedinou okolnosťou, ktorá môže vážne skresliť výsledky, je užívanie antibiotík, preto by vyšetreniu malo predchádzať obdobie niekoľkých dní alebo týždňov po užití takýchto liekov v závislosti od druhu antibiotika.

Na najmodernejších klinikách sa v poslednom čase na odber krvi na PCR používajú vákuové systémy, ktoré minimálne poškodzujú pokožku a minimalizujú pravdepodobnosť vniknutia kontaminantov zo vzduchu, prístrojov či rúk laborantov do vzorky.

Analýza rozmazania

Používa sa v gynekológii aj venerológii na určovanie pohlavne prenosných chorôb. Smear PCR sa často predpisuje počas tehotenstva na identifikáciu skrytých faktorov, ktoré môžu negatívne ovplyvniť tvorbu plodu alebo priebeh tehotenstva.

Príprava na výber materiálu spočíva v úplnom vylúčení pohlavného styku niekoľko dní pred zákrokom. Sprchovanie manganistanom draselným alebo bylinnými infúziami je tiež zakázané. Počas kritických dní a 2 dni po nich sa náter na analýzu PCR neodoberá.

Biomateriál sa odoberá v laboratóriu z vagíny, krčka maternice, krčka maternice alebo močovej trubice.

PCR analýza náteru vám umožňuje identifikovať patogén, ktorý je odolný voči určitému typu antibiotika. Okrem toho indikácie pre tento typ diagnostického vyšetrenia sú:

komplikované tehotenstvo bez zjavného dôvodu;
akútny priebeh pohlavnej choroby;
podozrenie na chronický priebeh pohlavnej choroby;
zisťovanie príčin neplodnosti alebo spontánnych potratov.

Analýza stolice

Test stolice pomocou polymerázovej reťazovej reakcie je predpísaný odborníkom na určenie prítomnosti infekcie. Príprava na odber vzorky stolice na PCR je nasledovná:

eliminovať laxatíva vo forme čapíkov, olejov alebo perorálnych liekov na niekoľko dní;
Deň predtým nekonzumujte lieky ani potraviny, ktoré dodávajú stolici výraznú farbu.

Materiál na stanovenie PCR je najlepšie dodávať v špeciálnej nádobe na stolicu s tyčinkou. Vnútro nádoby je sterilné a nemalo by sa utierať ani umývať. Pri odbere vzorky je dôležité zabezpečiť, aby ste sa nedotkli vnútorného povrchu prijímača a vo vzorke by nemali byť žiadne stopy moču. Pred výberom je zakázané používať klystíry.

Analýza moču

Táto štúdia PCR vám umožňuje extrahovať vzorku DNA vírusu alebo baktérie. Je lepšie zbierať moč ráno na prázdny žalúdok. Najlepšie je, ak sa tak stane priamo v laboratóriu.

Povinné podmienky prípravy na získanie výsledkov testov moču v laboratóriu polymerázovej reťazovej reakcie:

po užití antibiotík počkajte 3 týždne;
pred zberom tekutín nepite a nejedzte;
zákaz vaginálneho sexu jeden deň pred odberom vzorky;
Prvú časť materiálu musíte vložiť do nádoby po prebudení.

Interpretácia výsledkov

Diagnostické výsledky dešifruje špecialista, ktorý pacienta poslal na test PCR. Protokol vydaný laboratóriom môže obsahovať negatívny alebo pozitívny výsledok PCR:

Negatívny - prípad, v ktorom neboli nájdené žiadne fragmenty pôvodcu údajnej choroby, to znamená, že osoba je zdravá a v poslednej dobe touto chorobou netrpela.
Pozitívny - vo vzorke sa zistí RNA alebo DNA patogénu a osoba potrebuje liečbu.

Získané údaje by ste nemali interpretovať sami, pretože vekové normy sa môžu výrazne líšiť a rôzne titre naznačujú úplne odlišné štádiá ochorenia a prístupy k liečbe.

Vyzbrojený výsledkami diagnostiky PCR bude pre lekára ľahké určiť zoznam potrebných liečebných opatrení.

Presnosť diagnostiky PCR urobila túto techniku nepostrádateľnou pri diagnostike obrovského zoznamu chorôb a umožnila efektívnejšie identifikovať a eliminovať patogénne procesy vyskytujúce sa v ľudskom tele.

Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je vysoko presná metóda v oblasti diagnostiky dedičných patológií, infekcií, vírusových ochorení v akomkoľvek štádiu (akútnom alebo chronickom), ako aj - v počiatočnom štádiu - pred zjavnými prejavmi ochorenia identifikáciou patogény na základe ich DNA, RNA, ktoré sú genetickým materiálom, vo vzorkách získaných od pacienta. A dnes budeme hovoriť o podstate, diagnostických štádiách a princípoch metód polymerázovej reťazovej reakcie (PCR), ako aj o jej nákladoch.

Čo je polymerázová reťazová reakcia

Základom analýzy je amplifikácia (zdvojenie) - vytvorenie mnohých kópií z krátkeho úseku DNA (kyselina deoxyribonukleová), ktorá predstavuje ľudský genetický komplex. Štúdia vyžaduje veľmi malé množstvo fyziologickej látky (spútum, výkaly, epiteliálne škrabance, šťava z prostaty, krv, spermie, plodová voda, hlien, placentárne tkanivo, moč, sliny, pleurálna tekutina, cerebrospinálny mok). V tomto prípade môže byť napríklad v genitourinárnom trakte pacienta detekovaný aj jeden škodlivý mikrób.

Techniku PCR (polymerázová reťazová reakcia) vyvinul americký vedec K. Mullis, ktorý v roku 1993 dostal Nobelovu cenu.

Aktívne používané:

pri včasnej diagnostike infekcií, genetických;
pri súdnom lekárskom vyšetrení, keď je k dispozícii extrémne malé množstvo DNA na vyšetrenie;
V veterinárna medicína, liečivá, biológia, molekulárna genetika;
na identifikáciu osoby podľa DNA, potvrdenie otcovstva;
v paleontológii, antropológii, ekológii (pri sledovaní kvality produktov, environmentálnych faktorov).

Toto video vám podrobne povie, čo je polymerázová reťazová reakcia:

Komu je predpísaný?

Polymerázová reťazová reakcia v diagnostike infekčných chorôb je jednou z najspoľahlivejších metód mimoriadnej presnosti a spoľahlivosti. Napríklad spoľahlivosť analýzy PCR na chlamýdie a mnoho ďalších patogénov je takmer 100 % (absolútna). Najčastejšie je postup polymerázovej reťazovej reakcie predpísaný pacientom, ktorí majú počas diagnózy ťažkosti s identifikáciou konkrétneho patogénu.

Používa sa laboratórny test PCR:

na detekciu patogénov, spôsobenie infekcie močové a pohlavné orgány, ktoré je ťažké identifikovať pomocou kultivačných alebo imunologických metód;
na opätovnú diagnostiku HIV v počiatočnom štádiu v prípade pozitívneho, ale sporného výsledku počiatočného testu (napríklad u novorodencov od rodičov infikovaných AIDS);
identifikovať rakovinu v počiatočnom štádiu (štúdia mutácií onkogénov) a individuálne upraviť liečebný režim pre konkrétneho pacienta;
na účely včasnej detekcie a potenciálnej liečby dedičných patológií.

Budúci rodičia teda absolvujú test, aby zistili, či sú nositeľmi genetickej patológie, u detí PCR určuje pravdepodobnosť vystavenia chorobe prenášanej dedičnosťou.

na detekciu patológií plodu v počiatočných štádiách tehotenstva (jednotlivé bunky rastúceho embrya sa vyšetrujú na prítomnosť možných mutácií);
u pacientov pred transplantáciou orgánov - na „typizáciu tkaniva“ (určenie kompatibility tkaniva);
identifikovať nebezpečné patogénne organizmy v krvi darcu;
u novorodencov - identifikovať skryté infekcie;
na vyhodnotenie výsledkov antivírusovej a antimikrobiálnej liečby.

Prečo podstúpiť takýto zákrok?

Keďže PCR je vysoko účinná diagnostická metóda, ktorá poskytuje takmer 100% výsledky, používa sa postup:

potvrdiť alebo vylúčiť konečnú diagnózu;
rýchle posúdenie účinnosti terapie.

V mnohých prípadoch je PCR jediným možným testom na zistenie rozvíjajúceho sa ochorenia, ak sú iné bakteriologické, imunologické a virologické diagnostické metódy zbytočné.

Vírusy sa detegujú pomocou postupu PCR bezprostredne po infekcii a pred objavením sa príznakov ochorenia. Včasná detekcia vírusu umožňuje rýchlu liečbu.
Takzvaná „vírusová záťaž“ (alebo počet vírusov v tele) sa tiež určuje analýzou DNA pomocou kvantitatívnej metódy.
Špecifické patogény (napr. Kochov bacil tuberkulózy) sú náročné a kultivácia trvá príliš dlho. Testovanie PCR umožňuje rýchlu detekciu minimálneho množstva patogénov (živých a mŕtvych) vo vzorkách vhodných na testovanie.

Používa sa podrobná analýza DNA patogénu:

určiť jeho citlivosť na špecifické typy antibiotík, čo umožňuje okamžitú liečbu;
kontrolovať šírenie epidémií medzi domácimi a voľne žijúcimi zvieratami;
identifikovať a sledovať nové infekčné mikrobiálne druhy a podtypy patogénov, ktoré podnietili predchádzajúce epidémie.

Typy diagnostiky

Štandardná metóda

Analýza polymerázovej reťazovej reakcie sa uskutočňuje na základe viacnásobnej amplifikácie (zdvojenia) špecifického fragmentu DNA a RNA pomocou špeciálnych primerových enzýmov. V dôsledku kopírovacieho reťazca sa získa dostatočné množstvo materiálu na výskum.

Počas postupu sa skopíruje iba požadovaný fragment (zodpovedajúci špecifikovaným špecifickým podmienkam) a ak je skutočne prítomný vo vzorke.

Toto podrobné video s užitočnými schémami vysvetľuje, ako funguje PCR:

Iné metódy

PCR v reálnom čase. Pri tomto type výskumu sa proces identifikácie daného fragmentu DNA začína po každom cykle, a nie po dokončení celého reťazca 30 - 40 cyklov. Tento typ výskumu vám umožňuje získať informácie o množstve patogénu (vírusu alebo mikróbu) v tele, to znamená vykonať kvantitatívnu analýzu.
RT-PCR (reverzný transkripčný režim). Tento test sa používa na hľadanie jednovláknovej RNA na detekciu vírusov, ktorých genetickým základom je RNA (napríklad vírus hepatitídy C, vírus imunodeficiencie). V tejto štúdii sa používa špeciálny enzým - reverznej transkriptázy a na základe RNA sa vytvorí špecifický primér a jednovláknová DNA. Potom sa z tohto vlákna získa druhý reťazec DNA a vykoná sa štandardný postup.

Indikácie na testovanie

Postup PCR sa používa na klinike infekčných chorôb, neonatológie, pôrodníctva, pediatrie, urológie, gynekológie, venerológie, neurológie, nefrológie a oftalmológie.

Indikácie na testovanie:

určenie rizika vzniku genetických abnormalít u dieťaťa s pravdepodobnosťou dedičných patológií;
diagnostikovanie oboch rodičov pri plánovaní tehotenstva resp vo vážnom stave matky počas prebiehajúceho tehotenstva;
ťažkosti s počatím, identifikácia príčin neplodnosti;
podozrenie na sexuálne prenosné infekcie v akútnom štádiu a s príznakmi ich prechodu na chronické;
detekcia príčin zápalových procesov neznámeho pôvodu;
nechránené náhodné a pravidelné sexuálne kontakty;
stanovenie citlivosti patogénneho mikroorganizmu na špecifické antibiotiká;
pacienti s podozrením na latentnú infekciu na detekciu patogénov pred rozvojom zjavných symptómov (predklinická diagnóza);
pacientov na potvrdenie zotavenia po chorobe (retrospektívna diagnóza);:

Diagnostika sa používa aj vtedy, ak je potrebné presne identifikovať tieto patogény:

vírusy hepatitídy (A B C G), ľudská imunodeficiencia, cytomegalovírus;
Vibrio cholerae;
vírus herpes simplex, herpetiformné druhy;
retro - adeno - a rinovírusy;
vírusy rubeoly, Epstein-Barrovej, ovčích kiahní (Zoster);
parvo a pikornovírusy;
baktéria Helicobacter pylori;
Legionella, patogénne typy Escherichia coli;
Staphylococcus aureus;
patogén;
klostrídia, záškrt a hemophilus influenzae;

Používa sa tiež na určenie infekcií:

Infekčná mononukleóza;
borelióza, listerióza, kliešťová encefalitída;
kandidóza spôsobená hubami Candida;
pohlavne prenosné infekcie – trichomoniáza, ureaplazmóza, treponema pallidum, gardnerelóza, kvapavka, mykoplazmóza, chlamýdie;
tuberkulóza.

Kontraindikácie pre

Keďže postup sa nevykonáva s pacientom bez akéhokoľvek vplyvu na telo, ale s biologickým materiálom odobratým na výskum, neexistujú žiadne kontraindikácie pre PCR kvôli absencii potenciálneho nebezpečenstva.

Po kolposkopickom zákroku sa však z cervikálneho kanála maternice neodoberá biomateriál. Predloženie náterov a škrabancov na analýzu je povolené len 4–6 dní po skončení menštruácie a úplnom zastavení výtoku.

Je metóda bezpečná?

žiadne Negatívny vplyv na pacienta počas izolovanej štúdie jeho biomateriálu v laboratórnych podmienkach je nemožné.

Príprava na postup (predloženie biologických látok na analýzu)

Akákoľvek biologická tekutina, tkanivo alebo telesné sekréty slúžia ako vzorka pre analýzu PCR, ktorá deteguje DNA cudzieho patogénu. Testovaná látka sa odoberá vo forme odberu krvi zo žily, zoškrabu z hrtana, nosovej dutiny, močovej trubice, pleurálnej dutiny, krčka maternice.

Pred diagnostickým postupom lekár vysvetlí pacientovi, aký materiál sa bude zbierať:

Pri vyšetrovaní pohlavne prenosných infekcií sa odoberá sekrét z pohlavných orgánov, moč a ster z močovej trubice.
Pri analýze herpetických infekcií sa na analýzu odoberá cytomegalovírus, mononukleóza, moč a výter z hrdla, pri hepatitíde, toxoplazmóze sa odoberá krv zo žily.
Na diagnostické účely rôzne druhy Odoberá sa cerebrospinálny mok.
V pulmonológii sú vzorky na analýzu spútum a pleurálna tekutina.
Pri vykonávaní štúdie o možných vnútromaternicových infekciách počas tehotenstva sa na analýzu používa plodová voda a placentárne bunky.

Spoľahlivosť a presnosť analýzy závisí od sterility podmienok pri odbere materiálu. Keďže testovanie PCR je vysoko citlivé, akákoľvek kontaminácia testovanej látky môže skresliť výsledok.

Kompetentná príprava na dodávku biomateriálu nepredstavuje pre pacientov žiadne ťažkosti. Existujú určité odporúčania:

pri analýze pohlavne prenosných infekcií:
- vylúčiť intímne kontakty 72 hodín pred odoslaním materiálu;
- prestaňte používať akékoľvek vaginálne produkty 3 dni predtým;
- od večera predchádzajúceho dňa nevykonávajte hygienu vyšetrovanej oblasti;
- vylúčiť močenie 3–4 hodiny pred odberom vzorky z močovej trubice;
prestať užívať antibiotiká mesiac pred testovaním na infekcie;
krv sa daruje ráno pred jedlom a pitím;
Prvá ranná vzorka moču sa odoberie do sterilnej nádoby po dôkladnej intímnej toalete.

Prečítajte si nižšie o tom, ako sa vykonáva diagnostika pomocou metódy polymerázovej reťazovej reakcie.

Ako postup funguje?

Vykonávaním PCR štúdie znovu a znovu v reaktore (zosilňovači alebo tepelnom cyklovači) sa určité cykly opakujú:

Prvým krokom je denaturácia. Sliny, krv, bioptický materiál, gynekologické vzorky, spútum, v ktorých je podozrenie na prítomnosť DNA (alebo RNA) patogénu, sa umiestnia do zosilňovača, kde sa materiál zahreje a DNA sa rozštiepi na dva samostatné reťazce.
Druhým krokom je žíhanie alebo mierne ochladenie materiálu a pridanie primerov, ktoré dokážu rozpoznať požadované oblasti v molekule DNA a naviazať sa na ne.
Tretím krokom je predĺženie– nastáva po pripojení 2 primérov ku každému z reťazcov DNA. Počas procesu sa dokončí fragment DNA patogénu a vytvorí sa jeho kópia.

Tieto cykly sa opakujú ako „reťazová reakcia“, pričom zakaždým vedú k zdvojnásobeniu kópií špecifického fragmentu DNA (napríklad segmentu, v ktorom je naprogramovaný špecifický vírus). V priebehu niekoľkých hodín sa vytvorí veľa kópií fragmentu DNA a zistí sa ich prítomnosť vo vzorke. Potom sa výsledky analyzujú a porovnajú s údajmi z databázy rôznych typov patogénov, aby sa určil typ infekcie.

Prečítajte si nižšie o dekódovaní výsledkov a záveroch na základe reakcie PCR.

Dekódovanie výsledkov

Konečný výsledok štúdie je vydaný 1 – 2 dni po odovzdaní biologického materiálu. Často - už v prvý deň po analýze.

Kvalitatívna analýza

Negatívne výsledok znamená, že v látke predloženej na testovanie sa nenašli žiadne stopy infekčných agens.
Pozitívny výsledkom sa rozumie zistenie patogénnych vírusov alebo baktérií v biologickej vzorke s veľmi vysokou presnosťou v čase odovzdania materiálu.

Ak je výsledok pozitívny, ale nezistia sa žiadne známky zvýšenej infekcie, tento stav tela sa nazýva asymptomatický „zdravý prenos“. Najčastejšie pozorované pri odbere biomateriálu z určitého miesta (cervikálny kanál, močová trubica, ústna dutina) pri vírusových ochoreniach. V tomto prípade nie je potrebná liečba, ale je potrebný stály lekársky dohľad, pretože existuje možnosť:

šírenie vírusu z nosičov a infekcie zdravých ľudí;
aktivácia procesu a prechod choroby na chronickú formu.

Ak je však krvný test pozitívny, znamená to, že infekcia zasiahla telo, a to už nie je stav nosiča, ale patológia, ktorá si vyžaduje okamžitú špecifickú terapiu.

Kvantitatívna analýza

Kvantitatívny výsledok určuje špecialista špeciálne pre určitý typ infekcií. Na jeho základe je možné posúdiť stupeň vývoja a štádium ochorenia, čo umožňuje promptne predpísať správnu liečbu.

priemerná cena

Ceny za polymerázovú reťazovú reakciu sa určujú podľa: typu výskumu, náročnosti identifikácie patogénu, náročnosti odberu biologického materiálu, typu analýzy (kvalitatívnej alebo kvantitatívnej) a cenovej úrovne v laboratóriu.

Na druhej strane, pri štúdiu PCR je možné pri zbere jedného typu materiálu na analýzu identifikovať niekoľko patogénov naraz. To vám umožní ušetriť na iných laboratórnych testoch.

Približné náklady na analýzu PCR v rubľoch:

gonokok, gardnerella, trichomonas vaginalis – od 180
chlamydia trachomatis – od 190
papilomavírus - od 380 do 500
biocenóza urogenitálneho traktu u žien (kvantitatívne a kvalitatívne hodnotenie mikroflóry) – od 800.

Ešte viac užitočná informácia o štúdii PCR je uvedené vo videu nižšie:

Polymerázová reťazová reakcia je známa už 30 rokov. Je široko používaný v mnohých oblastiach, od archeológie po genetiku. Práve metóda PCR pomáha určiť otcovstvo, no najčastejšie sa používa na identifikáciu rôznych infekčných ochorení v ľudskom tele. Čo je to analýza PCR?

Nejde o nič iné ako o napodobňovanie procesu reprodukcie DNA, v dôsledku čoho sa z malého fragmentu molekuly DNA za určitý čas (zvyčajne niekoľko hodín) získa obrovské množstvo identických molekúl, ktoré už môžu byť študoval. Pripomína vám to niečo? Veľmi podobné klonovaniu. Práve polymerázová reťazová reakcia je základom klonovania a využíva sa pri reprodukcii tkanív v laboratóriu. V medicíne sa analýza PCR používa na identifikáciu baktérií (mykoplazmy, a patogény), vírusy (a papilomavírusy), huby (patogény) a prvoky (Trichomonas) v ľudskom tele.

Táto metóda molekulárnej diagnostiky infekčných patogénov je najcitlivejšia. Metóda PCR, ktorá umožňuje detekciu čo i len jediného fragmentu DNA vo vzorke, nemá prakticky žiadny limit citlivosti. A vo väčšine prípadov jeho výsledok ukazuje 100% presnosť, najmä pri diagnostike bakteriálnych infekcií. Nikdy nedáva falošne pozitívne výsledky.

Je tiež univerzálny, pretože umožňuje súčasne identifikovať niekoľko mikroorganizmov v jednej vzorke, pričom sa používajú bakteriologické metódy rôzne cesty kultivácia pre rôzne skupiny patogénov. Okrem toho PCR výrazne zjednodušuje úlohu výskumníkov, skracuje čas na vykonanie testu na 24 hodín a zjednodušuje požiadavky na prepravu vzoriek. Ak musí byť materiál pre bakteriologické a virologické metódy živý, tak pre metódu PCR je vhodné čokoľvek, čo obsahuje DNA, aj mŕtve bunky.

PCR analýza infekcií je mimoriadne dôležitá, pretože väčšina z nich postihujúcich ľudské telo sa vyvíja asymptomaticky alebo má podobné symptómy. Napríklad metóda PCR sa široko používa na identifikáciu príčin ochorení pečene vrátane A, B, C, D, E, ako aj vírusu herpes simplex. Na boj proti každému vírusu je potrebné použiť úplne inú taktiku liečby. Preto, aby lekár predpísal účinnú liečbu, musí presne identifikovať patogén. A ak sa uskutoční dlhodobý výskum, infekcia sa môže stať chronickou, čo spôsobí komplikácie, ktoré sú obzvlášť nebezpečné počas tehotenstva alebo iných sprievodných ochorení. A práve metóda PCR je hlavným asistentom rýchlej a presnej diagnostiky.

Tu však musíte pochopiť, že keďže je takmer jedinou metódou identifikácie niektorých mikroorganizmov (napríklad mykoplazmy), PCR môže byť pre iných úplne nevhodná (stafylokoky, streptokoky atď.), Preto si odborník musí zvoliť diagnostické metódy a predpísať liečbu. . Nestojí za to ísť do laboratória sami a robiť všetky testy v rade. Môžu sa ukázať ako úplne zbytočné. A na súkromných klinikách vám na vašu žiadosť a za vaše peniaze vykonajú akékoľvek testy bez toho, aby sa vás spýtali, prečo ich potrebujete.

Ako urobiť test PCR

Na uskutočnenie štúdií PCR sa používajú biologické tekutiny a sekréty Ľudské telo, ktoré môžu obsahovať mikróby a ich fragmenty. Patria sem: krv, sliny, spútum a moč. Okrem toho sa odoberú zoškraby epitelových buniek sliznice močovej trubice a cervikálneho kanála na analýzu PCR. Napríklad na zistenie vírusu HIV a hepatitídy sa krv odoberá zo žily. Na diagnostiku genitálnych infekcií sa analyzuje výtok z genitálií a ster z krčka maternice alebo močovej trubice. Na diagnostiku infekčnej mononukleózy sa používa výter z hrdla.

Príprava na analýzu PCR

Pred vykonaním testu by ste sa mali poradiť so svojím lekárom a starostlivo dodržiavať jeho odporúčania. Opýtajte sa lekára, aké materiály budú potrebné na štúdiu. Krvný test PCR sa odoberá na prázdny žalúdok. Pred vykonaním testu PCR vo forme škrabancov z epiteliálnych buniek však lekári odporúčajú, aby pacienti večer pili pivo, šli do kúpeľov a mali sex. Znie to zvláštne, ale toto všetko aktivuje infekciu v genitáliách, ktorá sa môže vyskytnúť vo veľmi miernej forme, a pomáha ju identifikovať.

Dešifrovanie analýzy PCR

Výsledok testu PCR môže byť pozitívny alebo negatívny. Toto je vždy uvedené v dokumente, ktorý musí vydať laboratórium. Pozitívny výsledok znamená, že v biologickom materiáli darovanom pacientom bola zistená DNA infekcie. Negatívny výsledok znamená, že v ľudskom tele nie je žiadna infekcia.

Keďže metóda PCR je vysoko citlivá, mala by sa používať na veľmi starostlivé sledovanie účinnosti liečby a až niekoľko týždňov po terapii. Koniec koncov, aj fragment DNA mŕtveho patogénu poskytne pozitívny výsledok testu PCR.

Polymerázová reťazová reakcia pomáha lekárom diagnostikovať infekcie, ktoré sa vyskytujú v ľudskom tele v latentnej forme, čím bráni ich rozvoju a vážnemu poškodeniu vnútorné orgány. Starostlivo sledujte svoje zdravie a pri prvom podozrení na infekciu sa poraďte s lekárom.

Vo väčšine prípadov musia pacienti čeliť situácii, keď je na vyšetrenie alebo určenie choroby potrebná PCR diagnostika. Je dôležité pochopiť, čo to je a prečo je to potrebné.

Metóda polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) je test, ktorý pomáha identifikovať mnohé choroby počiatočné štádiá rozvoj. Jeho podstatou je nájsť DNA alebo RNA patogénu prítomného v tele. PCR umožňuje určiť patogén v prípadoch, keď sú iné typy výskumu neúčinné.

Popularita túto metódu je jednoduchosť a šírka použitia. Používajú ho lekári na diagnostiku rôznych chorôb. Umožňuje rýchlo vykonávať komplexné kvantitatívne a genomické štúdie.

Jednou z najdôležitejších medicínskych aplikácií klasickej metódy PCR je detekcia mikroorganizmov, ktoré sú schopné vyvolať patologické stavy.

Podstata analýzy PCR

PCR diagnostika (čo to je, vysvetľuje molekulárna biológia) je metóda molekulárneho klonovania používaná na analýzu krátkej sekvencie DNA, ktorá je prítomná v minimálnych množstvách vo vzorkách obsahujúcich akýkoľvek genetický materiál. Táto metóda sa často nazýva „stroj na kopírovanie DNA“.

PCR diagnostika sa vykonáva in vitro (mimo tela) v laboratóriu a je založená na prirodzenom procese zdvojenia DNA pred jej rozdelením. Okrem schopnosti detekovať vírus, baktérie alebo iné mikroorganizmy vo vzorke vám PCR umožňuje identifikovať ich množstvo.

V prípade chorôb, ako je vírus hepatitídy C alebo vírus ľudskej imunodeficiencie (HIV), je vírusová záťaž dobrým indikátorom toho, kde sa choroba nachádza a ako účinná je liečba.

Vyzbrojení týmito informáciami môžu lekári určiť, kedy začať liečbu a sledovať proces. To nám umožňuje vytvoriť individuálny prístup ku každému pacientovi.

PCR diagnostika zahŕňa tri stupne, v každom z nich výrazne narastá množstvo cieľovej DNA. V dôsledku tejto reakcie sa získa viac ako jedna miliarda kópií pôvodnej alebo „cieľovej“ DNA, čo umožňuje posúdiť prítomnosť vírusu v tele. Toto je hlavná vlastnosť metódy PCR.

Výhody a nevýhody metódy

Diagnostiku PCR (čo je popísané vyššie) podrobne opísala Keri Mullis v roku 1983. Odvtedy je metóda mimoriadne populárna v laboratórnej praxi.

Hlavné výhody tohto typu výskumu sú:

všestrannosť;
rýchlosť výsledkov;
vysoká pravdepodobnosť získania spoľahlivých výsledkov;
špecifickosť;
rôzne choroby, ktoré možno identifikovať.

Všestrannosť metódy PCR spočíva v možnosti použitia akýchkoľvek ľudských fyziologických materiálov. Na rozbor stačí aj jeden vlas.

Proces spracovania údajov môže vďaka automatizácii trvať niekoľko hodín. Špecifickosť spočíva v izolácii určitého fragmentu DNA charakteristického pre konkrétny patogén. Pomocou PCR analýzy je možné diagnostikovať mnohé ochorenia v akútnom aj latentnom štádiu.

Napriek obrovskému množstvu výhod má však diagnostická metóda PCR aj nevýhody:

pravdepodobnosť falošne pozitívnych výsledkov;
vysoká citlivosť;
variabilita mikroorganizmov.

Hlavnou nevýhodou metódy je neschopnosť PCR rozlíšiť živé mikroorganizmy od mŕtvych. Spravidla ide o situáciu, kedy by sa mala posúdiť úspešnosť liečby. V tomto prípade, ak bola choroba liečená, potom mŕtve bunky zostávajú v ľudskom tele nejaký čas a na jeho úplné obnovenie trvá nejaký čas od 4 do 6 týždňov.

Vysoká citlivosť je výhodou a zároveň nevýhodou. Niektoré mikroorganizmy sú v tele prítomné v malom množstve. Preto v tomto prípade táto diagnostická metóda nie je informatívna a odporúča sa použiť iné typy výskumu.

Akékoľvek mikroorganizmy môžu mutovať. A aj keď proces amplifikácie používa špecifický fragment, ktorý je najmenej náchylný na zmeny, stále môže získať mutácie a stať sa neviditeľným pre testovací systém. Táto situácia vysvetľuje skutočnosť, že rôzne laboratórne testovacie systémy môžu vykazovať úplne odlišné výsledky.

V akých oblastiach sa metóda používa?

Testovanie PCR možno použiť v klinickej praxi na identifikáciu rôznych ochorení. Široko používaný v gynekológii, urológii, gastroenterológii, onkológii atď. Okrem toho sa účinne používa vo forenznej vede na určenie identity a určenie otcovstva.

Tento typ štúdie sa používa v štádiu plánovania a počas tehotenstva. Analýza infekcií TORCH sa vykonáva s cieľom zistiť prítomnosť infekcie v tele ženy. Choroby spôsobené niektorou z infekcií môžu byť pre ženu mierne, ale spôsobujú vážne vrodené chyby plodu, vrátane jeho smrti.

Diagnostická metóda PCR tiež pomáha určiť genetickú predispozíciu osoby na rozvoj určitých chorôb v budúcnosti.

Aké infekcie možno zistiť pomocou PCR diagnostiky?

Metóda PCR pomáha identifikovať vírusy, baktérie a huby.

Najčastejšie choroby, ktoré je možné pomocou neho diagnostikovať:

Aké biologické materiály sa študujú?

S prihliadnutím na ochorenie, symptómy a ciele štúdie môže diagnostika PCR použiť akúkoľvek fyziologickú tekutinu alebo tkanivovú časticu.

To môže byť:

krv;
sliny;
spúta;
moč;
výlučky;
orofaryngeálny tampón;
kúsok postihnutého tkaniva;
synoviálna tekutina;
škrabanie z vagíny u žien alebo z močovej trubice u mužov;
ejakulát;
vlasy a iné.

Pri ochoreniach urogenitálneho systému sa odoberá moč alebo ster z vagíny u žien alebo z močovej trubice u mužov. Venózna krv sa daruje na diagnostiku chorôb ako HIV, hepatitída rôzne druhy, infekcie TORCH.

Aby sa vylúčila alebo potvrdila onkológia, počas chirurgických zákrokov sa odoberú kúsky tkaniva na biopsiu.

Ako sa pripraviť na analýzu

Vlastnosti prípravy na výskum závisia od predloženého biomateriálu. Mali by ste tiež pamätať na to, že je potrebné vyhnúť sa užívaniu antibiotík a iných liekov. Na sledovanie účinnosti liečby je potrebné dodržať interval po užití liekov najmenej 4 týždne.

Krv sa daruje ráno na prázdny žalúdok. Moč a výkaly musia byť umiestnené v určenej, úplne sterilnej nádobe. Zároveň pred odberom moču je potrebné vykonať hygienu vonkajších genitálií.

Ak podstupujete test rozteru, musíte:

nemočiť 3 hodiny;
Neodporúča sa umývať a sprchovať deň predtým (pre ženy);
zastaviť sexuálnu aktivitu jeden deň predtým;
Ženy by mali mať uprostred cyklu test rozteru.

Etapy výskumu PCR

Pred začatím PCR sa musí zo vzorky extrahovať DNA. Extrakcia DNA je viacstupňový proces, ktorý možno vykonať manuálne alebo inštrumentálne.

Keď je vzorka pripravená, začína sa trojkrokový proces PCR:

separácia cieľovej DNA (denaturácia);
amplifikácia (reprodukcia) fragmentov DNA;
detekcia (detekcia) amplifikovaných fragmentov DNA.

Prvá fáza PCR sa nazýva denaturácia. Jej podstatou je zahriatie skúmavky so vzorkami DNA vysoké teploty(približne 90 stupňov). V dôsledku vysokých teplôt sa ničia slabé väzby medzi nukleotidmi, ktoré tvoria kód molekúl. To vedie k rozdeleniu dvojvláknovej DNA alebo RNA na dve samostatné vlákna.

Pre „čistotu“ štúdie sa do skúmaného biomateriálu pridáva špeciálny roztok, ktorý rozpúšťa organické látky. Trvanie tohto štádia závisí od typu testovaného materiálu a infekčného agens.

PCR diagnostika (čo je popísané vyššie) v druhom štádiu reprodukuje fragmenty DNA založené na DNA samotnej infekcie. PCR nekopíruje všetku nukleovú kyselinu vo vzorke. Kopíruje iba špeciálnu sekvenciu genetický kód, krátky fragment (primer).

V druhej fáze sa skúmavka ochladí. Celý proces PCR je automatizovaný pomocou stroja nazývaného termostat alebo cyklovač a môže byť dokončený v priebehu niekoľkých hodín. Zariadenie PCR je naprogramované tak, aby každých niekoľko minút menilo teplotu reakčnej zmesi. K tomu dochádza tak, že krátke fragmenty sa môžu viazať na jednovláknový templát.

Amplifikácia prebieha v 30-40 cykloch. Počas tohto obdobia laboratórny lekár skopíruje fragment DNA a zvyšuje jeho množstvo pomocou metódy reťazovej reakcie. S každým cyklom sa teda počet kópií zvyšuje na niekoľko miliónov alebo dokonca miliárd.

V tretej fáze štúdie sa zisťuje prítomnosť DNA vírusov a baktérií. To sa deje distribúciou výslednej zmesi a pridaním špeciálneho roztoku. Táto kvapalina umožňuje fragmentom DNA získať určitú farbu pod vplyvom ultrafialových lúčov. To je indikátor prítomnosti patogénnych mikróbov v ľudskom tele.

PCR počas tehotenstva

Diagnostika PCR (čo je to popísané vyššie) môže byť prvýkrát predpísaná počas tehotenstva, pretože ide o povinný postup. Táto metóda pomáha identifikovať skryté infekcie a riziko vzniku defektov u plodu.

Na vykonanie analýzy použite:

Existujú infekčné choroby, ktoré môžu negatívne ovplyvniť vývoj plodu, spôsobujú defekty, spôsobujú predčasný pôrod a potraty. Sú nebezpečné najmä v prvom trimestri tehotenstva a vo väčšine prípadov sú medicínskou indikáciou na ukončenie tehotenstva. Tieto infekcie sa súhrnne nazývajú komplex TORCH.

Analýza PCR pomáha určiť prítomnosť alebo neprítomnosť infekcie v tele tehotnej ženy. Často sa vykonáva vo fáze plánovania tehotenstva alebo v prvom trimestri. Ak je výsledok pozitívny, je potrebný opakovaný test. A až po potvrdení výsledkov je predpísaná vhodná liečba.

PCR na diagnostiku HIV

Metóda PCR na diagnostiku infekcie HIV je drahý test a používa sa podľa špeciálne indikácie. Patrí medzi ne darcovstvo a môže byť predpísaný aj pacientom zraneným pri dopravnej nehode s ľuďmi prenášajúcimi HIV.

PCR pomáha určiť prítomnosť infekcie na skoré štádia predtým, ako telo vytvorí protilátky proti HIV. Výsledok s vysoké percentoŠtúdia môže ukázať pravdepodobnosť do 5-14 dní po preniknutí vírusu.

V iných prípadoch prítomnosť vírusu v ľudskom tele pomáha zaviesť enzýmovú imunoanalýzu (ELISA). Zisťuje protilátky proti HIV v krvi človeka, ktoré sa začínajú produkovať 1-3 mesiace po infekcii. Na sledovanie liečby pacientov je potrebné kvantitatívne stanovenie a analýza mikroorganizmov.

PCR na diagnostiku hepatitídy

Vírusová hepatitída C je závažné ochorenie, ktoré môže viesť k rozvoju cirhózy pečene. Počas inkubačnej doby, ktorá môže byť až 12 mesiacov, sa vírus nijako neprejavuje, pacient prakticky nie je nákazlivý a vírus sa nedá zistiť bežným krvným testom.

Najčastejšie, ak sa nelieči včas, choroba sa stáva chronickou a hrozí viacerými komplikáciami.

Pri infikovaní hepatitídou B nie je inkubačná doba taká dlhá a prvé príznaky možno pozorovať po 4 týždňoch. Práve v tomto období môže ELISA preukázať prítomnosť vírusu v tele.

Metóda PCR umožňuje:

identifikovať ochorenie v štádiu vývoja inkubácie;
vyriešiť sporné analýzy iných štúdií;
vyhodnotiť účinnosť antivírusovej terapie.

Neprítomnosť DNA vírusu hepatitídy po liečbe je znakom jeho účinnosti.

Test na tuberkulózu

Rozvoj tuberkulózy vyvoláva Kochov bacil, ktorý sa môže dostať do ľudského tela vzdušnými kvapôčkami. Ochorenie má dve formy: skryté a otvorené. V prvom prípade infikovaná osoba nie je nosičom infekcie a mykobaktérie v spúte nie sú detekované ani pomocou PCR. Táto forma je stále nebezpečná, pretože je schopná vstúpiť na otvorenú scénu.

Otvorené (aktívne) štádium predstavuje nebezpečenstvo pre ostatných aj pri dôslednom dodržiavaní pravidiel osobnej hygieny. Na diagnostiku ochorenia sa používa fluorografia, tomografia a röntgenové lúče. hrudník. Aj na tento účel sa používa tuberkulárny kožný test (Mantoux test). Ale väčšina efektívna metóda výskum je PCR.

Nasledujúce vzorky sa používajú ako skúšobné vzorky:

krv;
spúta;
bronchiálna tekutina.

PCR na diagnostiku HPV

Diagnóza HPV sa vykonáva v prítomnosti symptómov ochorenia, ako sú papilómy a bradavice v oblasti genitálií. Štúdia je tiež predpísaná v štádiu plánovania tehotenstva, v prípade neplodnosti, potratov, ako aj v situácii infekcie jedného z partnerov, pretože jeden z mechanizmov prenosu vírusu je sexuálny.

Najnebezpečnejšou vecou nie je prítomnosť vírusu v tele, ale jeho typ. Niektoré z jeho typov (16 a 18) sú vysoko onkogénne a môžu spôsobiť rakovinu krčka maternice u žien. Metóda PCR môže byť predpísaná v spojení s inými typmi výskumu. Na analýzu sa najčastejšie používa náter z pohlavných orgánov. Krv, moč a vaginálny výtok sa ako biomateriály používajú veľmi zriedkavo.

Na herpes

Tento test diagnostikuje genitálnu infekciu vírusom herpes simplex typu 1 a 2 (HSV1/HSV2). Ak je výsledok HSV2 pozitívny, mali by ste byť testovaní na HIV a iné pohlavne prenosné choroby. Analýza vyžaduje pacientovu venóznu krv.
Ak sú prítomné symptómy, možno vyšetriť aj moč, sekréty a obsah vyrážok.

Komplexné vyšetrenie PCR

Ak je to indikované alebo na účely prevencie ochorenia, možno predpísať súbor testov PCR. Najčastejšie je iniciátorom samotný pacient, existujú prípady, keď je predpísané komplexné vyšetrenie na prevenciu prepuknutia určitých chorôb v určitom regióne.

PCR-12 je komplexná štúdia, ktorá zahŕňa nasledujúce infekcie:

Hepatitída.
Herpes.
STD.
Tuberkulóza.
encefalitída.
Kandidóza.
Infekcia Helicobacter pylori.
Cytomegalovírus.
Mononukleóza.
Onkovírusy.
Listerióza.

Vysvetlenie analýzy PCR

Po analýze pomocou metódy PCR možno oznámiť pozitívny alebo negatívny výsledok.

Výsledky diagnostiky PCR vyzerajú takto. Lekár vám povie, čo to je a ako to dešifrovať

Presnosť diagnostiky PCR

Vo väčšine prípadov poskytuje diagnostika PCR vysoko presné výsledky. Ale v niektorých prípadoch sú na potvrdenie správnej diagnózy potrebné ďalšie výskumné metódy.

Čo môže spôsobiť falošný výsledok?

Falošne pozitívne výsledky môžu byť výsledkom nedodržania pravidiel zberu analýzy a samotného vykonávania výskumného postupu.

V prípade nedostatočnej prípravy na dodávku biomateriálu môže byť vinníkom nepravdivých informácií aj samotný pacient. Vybavenie laboratória a profesionalita lekára môžu priamo ovplyvniť výsledky štúdie.

Kde získať diagnostiku PCR

PCR diagnostika sa vykonáva v súkromných klinikách a laboratóriách na príkaz lekára alebo z iniciatívy samotného pacienta za účelom prevencie.
Prednosť by mali dostať kliniky a laboratóriá s moderným vybavením, ktoré sú na medicínskom trhu už niekoľko rokov a osvedčili sa.

PCR analýza: náklady a načasovanie

Táto diagnostická metóda je drahá. Jeho cena sa pohybuje od 200 do 500 rubľov za každý typ. Komplexné vyšetrenie na prítomnosť viacerých infekcií môže výrazne ušetriť v porovnaní s platbou za každé jednotlivé vyšetrenie.

Trvanie štúdie závisí od typu infekcie a môže trvať 1 až 5 dní. Tieto ukazovatele tiež závisia od vybavenia laboratória a kvalifikácie zdravotníckeho pracovníka.

Diagnostika PCR (čo to je, je podrobne popísané v tomto článku) je najpresnejšia a najrýchlejšia metóda výskumu. Ide o jeden z najvýznamnejších objavov 20. storočia. v medicíne.

Vďaka tejto metóde bolo možné úplne vyliečiť mnohé choroby. Nemali by sme však zabúdať, že PCR má aj určité nevýhody a jej účinnosť sa niekedy zvyšuje spolu s použitím iných výskumných metód.

Formát článku: Vladimíra Veľkého

Video o diagnostike PCR

O presnosti PCR:

IN moderná medicína PCR analýza biologických tekutín tela je vysoko presná a informatívna. Pomocou tejto analýzy sa zisťuje prítomnosť vírusových a mikrobiálnych častíc v tele, aj keď je choroba skrytá a nevykazuje žiadne príznaky.

Čo to znamená predpísať vám test PCR? Táto skratka znamená metódu polymerázovej reťazovej reakcie - ide o špeciálny spôsob vykonávania laboratórny výskum. Pri tejto metóde sa biologický materiál získaný od pacienta umiestni do špeciálneho prístroja. Do testovacieho média sa pridá sada reagenčných enzýmov, ktorá pomáha reprodukovať genetický materiál patogénu (vírus alebo mikrób). Reakcia vytvára veľké množstvo kópií DNA alebo RNA, čo umožňuje identifikáciu porovnaním s databázou vírusových aj mikrobiálnych infekcií.

Čo znamená výsledok testu PCR? Ak je v ľudskom tele pôvodca akejkoľvek infekcie, aj skrytého, tento rozbor odhalí nielen jeho prítomnosť, ale aj to, v akom množstve sa táto infekcia v tele nachádza.

Na testovanie infekcií pomocou metódy PCR môžete vyšetriť všetky biologické tekutiny tela - krv, moč, sliny, pohlavné sekréty, hlien hrdla a nosa. Analýza si vyžaduje veľmi málo materiálu, pretože ak sú prítomné patogény, reprodukciou ich kópií sa koncentrácia genetickej informácie dostane na takú úroveň, že identifikuje mikrób alebo vírus a určí jeho typ. Presnosť PCR analýzy je veľmi vysoká, pomocou tejto analýzy je dnes možné určiť takmer všetky rozšírené vírusové, mikrobiálne a iné infekcie.

Čo však PCR analýza najčastejšie odhalí? V zozname infekcií, ktoré je možné touto metódou zistiť, sú infekčné, vrátane spoločensky nebezpečných infekcií, ako sú tuberkulóza či hepatitída B a C. Tou istou metódou je možné odhaliť infekciu HIV, chlamýdiové a ureaplazmové infekcie, mykoplazmózu dýchacích ciest a pohlavných orgánov. Pomocou tejto analýzy sa zisťuje drozd, bakteriálna vaginóza a trichomoniáza. Schopnosti tejto metódy umožňujú identifikovať skryté infekcie - rôzne typy herpesu, HPV (papilomavírus), ako aj identifikovať špeciálneho mikróba zodpovedného za vznik žalúdočných vredov - Helicobatera.

Dnes môžete urobiť test PCR takmer v každom súkromnom alebo verejnom laboratóriu. Tieto typy testov sa vykonávajú u všetkých, detí aj dospelých. V závislosti od účelu analýzy sa analyzuje rôzny biologický materiál v závislosti od pohlavia.

PCR analýza u mužov sa teda vykonáva na krvi alebo moči, uretrálnych sekrétoch, hliene z hrdla alebo nosa, prostatickej šťave alebo dokonca spermiách. PCR analýza u žien je možná v krvi a moči, vaginálnych sekrétoch, výtoku z močovej rúry, hlienu z nosa a hltana.

V tehotenstve sa veľmi často využíva PCR analýza, pomocou ktorej sa zisťujú skryté infekcie v pošvovom sekréte alebo krvi, ktoré si v tomto období vyžadujú špeciálne sledovanie a niekedy aj adekvátnu liečbu.

Ako sa vykonáva PCR?

Infekčný test pomocou tejto metódy predpisuje lekár, materiál sa často okamžite odoberá v ordinácii lekára - urológa alebo gynekológa. Ako prebieha analýza PCR?

Skúmaný materiál sa v laboratóriu zmieša s činidlami a čaká sa na reakciu. Ak sú prítomné patogény, množia sa kópie ich DNA alebo RNA. Prístroj porovnáva identifikované fragmenty genetického materiálu s databázami a presne identifikuje pôvodcu infekcie. V prípade potreby sa uvádza aj množstvo patogénu v určitých telesných tekutinách. Štúdia zvyčajne netrvá dlhšie ako 1-2 dni, v prípade potreby sa vykonajú expresné testy.

Odkiaľ získavate analýzu PCR? To bude závisieť od toho, aké typy patogénov sú podozrivé. Ak ide o HIV alebo hepatitídu, odoberie sa krv, ak ide o sexuálne prenosné infekcie, odoberie sa ster z močovej trubice alebo vagíny. Pri podozrení na mononukleózu alebo herpes sa robí výter z hrdla. Možno použiť aj moč, mozgovomiechový mok, výtok z rán, spútum a pod.

Krvný test PCR

Pre presné výsledky a diagnostiku infekcií je dôležité darovať krv ranné hodiny nalačno. Krvný test pomocou PCR môže identifikovať patogény nebezpečných chorôb- HIV, hepatitída, syfilis. Počas obdobia exacerbácie a aktivity vírusu je možné v krvi zistiť herpes vírusy, papilómy a niektoré ďalšie.

PCR analýza: príprava

Pre absolútnu presnosť analýzy je dôležitá správna príprava na ňu. Najjednoduchší spôsob, ako sa pripraviť na krvný test, je, že neexistujú žiadne obmedzenia týkajúce sa stravovania alebo aktivity, krv je potrebné odobrať ráno nalačno. Po umytí genitálií sa vykoná test moču zo strednej časti do špeciálnej sterilnej nádoby. PCR analýza z genitálneho traktu si zaslúži osobitnú pozornosť, preto je dôležité vedieť sa pripraviť. Deň pred vyšetrením je zakázaný sex, odporúča sa pred vyšetrením nemočiť. Počas menštruácie u žien sa dátum analýzy posúva o 3 až 5 dní od posledného výtoku.

Ako dlho trvá vykonanie testu PCR?

V závislosti od možností laboratória môže byť analýza pripravená od niekoľkých hodín až po niekoľko dní. Koľko dní v priemere trvá test PCR? Zvyčajne je to jeden alebo dva dni. o pohotovostna situacia analýza môže byť vykonaná v ten istý deň, za niekoľko hodín.