PCR analiza na 5 infekcija. PCR analiza je najprecizniji test za otkrivanje infekcija. PCR metoda omogućuje

Za uspješno liječenje najviše važna točka je brza dijagnoza bez grešaka. U U zadnje vrijeme Popis metoda i mogućnosti dijagnostičkih centara, klinika i bolnica u području dijagnostike stalno se proširuje. Nakon pojave relativno nove tehnike - PCR analize, ova metoda brzo je stekla pristaše među medicinskim radnicima, jer je često nezamjenjiva u prepoznavanju zaraznih bolesti.

Opseg primjene metode koja se temelji na lančanoj reakciji polimeraze nije ograničen samo na medicinu, već je PCR dijagnostika postala najraširenija za identifikaciju raznih bolesti.

Neosporne prednosti PCR-a uključuju sljedeće:

• Vrlo visoka osjetljivost. Obično govore o osjetljivosti od 95 do 100%, ali to su prosječni podaci. Ovaj pokazatelj se razlikuje za različite mikroorganizme. Dakle, za hepatitis C nikad nije niži od 97% (pod uvjetom da su ispunjeni svi zahtjevi), a za određivanje ureaplazmoze - ne manje od 99%. Ta je osjetljivost trenutno najviša, tako da metoda gotovo da nema konkurencije po ovoj karakteristici.
• Mogućnost korištenja u najranijim fazama. U vrijeme kada druge dijagnostičke metode još ne mogu identificirati uzročnika zbog njegove male količine u uzorku, PCR već daje točan rezultat. Prisutnost patogena može se otkriti čak iu prisutnosti jednog uzorka, au nekim slučajevima i samo fragmenta mikroba. Iz tog razloga, metoda se također koristi za kronične ili latentne patologije, kao iu fazi inkubacije.
• Širok raspon rezultata. Analiza može identificirati nekoliko patogena u isto vrijeme, što ne zahtijeva ponovljene manipulacije. Ponekad je moguće pronaći uzročnike koji se nisu ni očekivali tijekom početne dijagnoze.
• Svestranost uzoraka. Uzorak može uključivati ​​uzorke krvi, sline, sputuma, kose, vaginalnog iscjetka i stanica različitih tkiva.
• Brzina dobivanja rezultata. U većini slučajeva odgovor se dobije unutar 5-6 sati. Za analizu kulture koja se po točnosti približava lančanoj reakciji polimerazom, isti se rezultat može dobiti za nekoliko dana do nekoliko tjedana.
• Kvantitativno određivanje uzročnika. Ovaj parametar omogućuje određivanje titra mikroba u materijalu, a ovo je svojstvo često potrebno za procjenu učinkovitosti odabrane taktike liječenja.
• Identifikacija samog mikroorganizma, a ne određivanje njegovih reakcija. Većina analiza temelji se na odgovoru patogena na kemijske reagense, bojenje itd. Ova dijagnostička metoda omogućuje izravno otkrivanje mikroba, a ne neizravnih znakova, protutijela itd.

Unatoč tako širokom popisu prednosti, metoda ima i neke nedostatke:

• Lažna detekcija mikroorganizama može se pojaviti zbog kontaminacije uzorka iz prethodnog uzorka. To se događa kada su instrumenti ili reagensi uključeni u analizu kontaminirani. Čak iu zraku postoje fragmenti mikroba koji mogu utjecati na rezultate, pa se u takvim laboratorijima mora instalirati biološki filter s maksimalnim stupnjem pročišćavanja zraka.
• Lažno negativan rezultat. Čak i uz sve očite manifestacije bolesti, ponekad se dobivaju negativni podaci. Razlog tome je krivo mjesto za uzimanje uzorka, pa laboratorijsko osoblje mora imati dovoljno kvalifikacija, znanja i iskustva.
• Podatke treba procijeniti isključivo liječnik, jer je tumačenje rezultata PCR analize složen proces. Pozitivan odgovor ne znači uvijek bolest. Činjenica je da nakon uspješnog liječenja bolesti, fragmenti patogena su prisutni u krvi dugo vremena, tako da samo vrlo kvalificirani stručnjak može donijeti zaključak.
• Visoka cijena dijagnostike pomoću lančane reakcije polimeraze. Cijena je posljedica skupe opreme i visokih zahtjeva za laboratorijske uvjete i kvalifikacije osoblja.

Obavezni uvjeti za dobivanje točnih podataka u PCR laboratorijima:

• ispravan mehanizam za uzimanje uzoraka i njihov ispravan transport u laboratorij;
• strogo pridržavanje metoda tijekom analize;
• visoka sterilnost i maksimalna automatizacija procesa;
• korištenje jednokratnih instrumenata;
• sustav interne laboratorijske kontrole za potvrdu pouzdanosti podataka.

Pod uvjetom da su ispunjeni svi zahtjevi, na temelju podataka dobivenih PCR tehnikom, moguće je ne samo odrediti bolest, već napraviti prognozu njezinog tijeka i izraditi algoritam liječenja.

Suština metode

Lančana reakcija polimeraze omogućuje vam brzo kopiranje i reprodukciju lanaca DNK mikroba koji je uzrokovao bolest. Kako bi se proces odvijao brzo, koriste se posebni enzimski pripravci koji ubrzavaju replikaciju i izgradnju lanca nukleotida.

Nakon završenog postupka, prisutnost uzročnika u uzorku se povećava milijunima puta, nakon čega njegova detekcija i identifikacija nije problem.

Laboratorijski tehničar može usporediti dobiveni uzorak s onima prikazanim u bazi podataka i točno ga imenovati, kao i odrediti njegovu izvornu količinu.

Osim toga, tehnika vam omogućuje kloniranje pojedinačnih dijelova lanca DNK, izazivanje potrebnih mutacija u njima te međusobno kombiniranje i kombiniranje dijelova.

Područja primjene

U medicini se najviše koristi PCR dijagnostika. Uz njegovu pomoć možete identificirati virusne, zarazne, nasljedne bolesti, a to se može učiniti ne samo u aktivnoj fazi, već i odmah nakon infekcije.

Područja medicine u kojima se PCR metoda aktivno koristi za dijagnostiku:

• urologija i ginekologija - za otkrivanje većine spolno prenosivih bolesti (ureaplazmoza, herpes, sifilis, gonoreja, gardnereloza, trihomonijaza, klamidija, HIV, mikoplazmoza, humani papiloma virus, kandidijaza itd.);
• pulmologija - za tuberkulozu ili upalu pluća bakterijske ili virusne prirode;
• gastroenterologija - za helikobakteriozu;
• u hematologiji - s citomegalovirusom, raznim onkovirusima krvi;
• u području zaraznih bolesti - za otkrivanje difterije, salmoneloze, mononukleoze, listerioze, hepatitisa virusnog podrijetla, encefalitisa;
• u onkologiji - za određivanje raka dojke, leukemije, limfoma.

Ova metoda se također koristi u neonatologiji, pedijatriji, oftalmologiji, neurologiji - u gotovo svim granama medicine pokazala se potrebnom.

U videu je detaljno opisano koje se infekcije mogu otkriti lančanom reakcijom polimerazom.

Većina spolno prenosivih bolesti brzo se i uspješno dijagnosticira zahvaljujući PCR dijagnostici. Osim identifikacije patogena, ova metoda vam omogućuje da saznate specifični soj mikroorganizma, što omogućuje odabir najučinkovitijeg lijeka za liječenje.

Osim u medicini, PCR metoda se koristi iu drugim područjima:

• Forenzika i sudska medicina - Pomaže u identificiranju kriminalca uspoređujući genetski materijal osumnjičenika s uzorcima pronađenim na mjestu zločina.
• Utvrđivanje očinstva - uspoređuju se umnoženi genetski setovi roditelja i djeteta, pronalaze identični fragmenti na temelju kojih se može prosuditi stupanj njihove povezanosti.
• Znanost koristi metodologiju tijekom pokusa koristeći genske mutacije, utvrđivanje odnosa evolucijskih grana pojedinih organizama itd.

PCR dijagnostika u venerologiji

Mnoge infekcije koje uzrokuju spolne bolesti, u početnim su fazama vrlo slični u manifestacijama i simptomima, pa ih je prilično teško razlikovati. Istodobno, rana identifikacija uzročnika infekcije omogućuje što raniji početak liječenja i smanjenje vremena liječenja na minimum, izbjegavajući razvoj mogućih komplikacija.

Lančana reakcija polimeraze je učinkovit mehanizam za identifikaciju sljedećih skupina genitalnih bolesti:

• bakterijske infekcije (sifilis, donovanoza, gonoreja, klamidija, itd.);
• virusne patologije (papilomatoza, kondilomatoza, HIV, genitalni herpes, itd.);
• gljivice (soor, balanopostitis, itd.)

U dermatovenerologiji je posebno korisno svojstvo ove tehnike da pronađe uzročnike infekcije tijekom razdoblja remisije ili tijekom nošenja, kada osoba može zaraziti partnera bez simptoma bolesti.

Napredak analize lančane reakcije polimerazom

PCR analiza odvija se u 4 glavne faze:

• priprema materijala za kopiranje;
• kombiniranje fragmenta DNA i početnice;
• kopiranje genetskog skupa materijala koji se proučava;
• identifikaciju i procjenu dobivenog skupa DNK.

1. faza

Uzorak se zagrijava na temperaturu od 94-98°C u posebnom uređaju – termalnom cikleru, koji je programiran za održavanje preciznih temperatura s malom pogreškom. Postavljena temperatura održava se minutu ili dvije. Ovo je neophodno za denaturaciju DNK tako da se dvostruka spirala odvoji u dva odvojena lanca.

Faza 2

Temperatura u termalnom cikleru smanjena je na 72-75°C kako bi početnica mogla prepoznati dio DNK lanca sličan njemu i spojiti se s njim.

Primeri su posebni reagensi koji su prikladni samo za jednu vrstu patogena. Ako je potrebno analizirati nekoliko patogena, tada se uzorku dodaje potreban broj primera.

U ovoj fazi, DNK replicira svoj predložak pomoću početnice.

Laboratorijske mogućnosti ograničene su dostupnošću primera za određene mikroorganizme, pa je raspon mogućnosti određen dostupnošću takvih uzoraka.

Faza 3

U ovom segmentu dolazi do povećanja genetskog materijala uzročnika. Enzim prilazi početnici s predloškom i reproducira novi lanac DNK identičan onom sadržanom u izvornom lancu.

Kada je sinteza završena, jedan puni ciklus lančane reakcije polimeraze je završen. Vremenski traje u prosjeku do 3 minute. Tijekom tog vremena materijal se udvostruči. Daljnje povećanje broja lanaca događa se u geometrijskoj progresiji, a do kraja analize je završeno 50-80 ciklusa.

Faza 4

Pozornica koja zahtijeva pažnju i posebnu brigu od strane osoblja.

Određivanje mikroorganizama događa se pomoću elektroforeze ili tragova bojenja. Kod primjene elektroforeze odlučujući faktor je duljina fragmenata DNA, a kod korištenja oznaka razvoj boje tijekom enzimske reakcije.

Vrste PCR testova

Postoje mnoge varijacije takve PCR dijagnostike. Odabir pojedine metode ovisi o mnogim čimbenicima: pretpostavljenoj dijagnozi, mogućnostima raspoloživih laboratorija, načinu prikupljanja materijala itd.

Najčešće korištene vrste PCR-a su:

• ugniježđen;
• stepenasto;
• s vrućim startom;
• virtualan;
• asimetričan;
• u stvarnom vremenu itd.

Pretežno se koristi PCR u stvarnom vremenu, jer se metoda odlikuje najtočnijim rezultatima i maksimalnom brzinom obrade podataka. Nakon upotrebe, zaključak je spreman za sat ili dva.

Metoda se široko koristi u pedijatriji za otkrivanje virusa i infekcija krvi, genetskih bolesti i TORCH infekcija. Neonatolozi propisuju takvu dijagnostiku u problematičnim slučajevima doslovno od prvih dana života. Ponekad takva dijagnostika omogućuje otkrivanje infekcije intrauterine tekućine, što predstavlja opasnost za razvoj fetusa tijekom razdoblja aktivnog formiranja.

Ako liječnik izda uputnicu za pregled pomoću lančane reakcije polimeraze, tada mora razjasniti kakvu vrstu biomaterijala treba dati pacijentu i kako se pripremiti za uzimanje uzorka.

Analiza krvi

Krv se uzima kao biomaterijal za testiranje ako postoji sumnja na HIV, virusni hepatitis, toksoplazmu, genitalni herpes i citomegaliju. Za većinu ovih uzročnika prije primjene ove metode dijagnoza se temeljila na otkrivanju protutijela na uzročnika, što je uvelike odgađalo vrijeme otkrivanja mikroba u razdoblju kada se protutijela još nisu proizvela.

Prije davanja krvi za dijagnozu u ovom slučaju nisu potrebne posebne pripreme, ali je bolje ako se uzorak uzima na prazan želudac. Jedina okolnost koja može ozbiljno poremetiti rezultate je primjena antibiotika, pa testu treba prethoditi nekoliko dana ili tjedana nakon uzimanja takvih lijekova, ovisno o vrsti antibiotika.

U najsuvremenijim klinikama odnedavno se za prikupljanje krvi za PCR koriste vakuumski sustavi koji minimalno oštećuju kožu i minimiziraju vjerojatnost ulaska kontaminanata iz zraka, instrumenata ili ruku laboratorijskih tehničara u uzorak.

Analiza razmaza

Koristi se u ginekologiji i venerologiji za određivanje spolno prenosivih bolesti. PCR razmaza često se propisuje tijekom trudnoće kako bi se identificirali skriveni čimbenici koji mogu negativno utjecati na formiranje fetusa ili tijek trudnoće.

Priprema za odabir materijala sastoji se od potpunog isključivanja spolnog odnosa nekoliko dana prije postupka. Također je zabranjeno ispiranje s kalijevim permanganatom ili biljnim infuzijama. Tijekom kritičnih dana i 2 dana nakon njih ne uzima se bris za PCR analizu.

Biomaterijal se prikuplja u laboratoriju iz vagine, cerviksa, cervikalnog kanala ili uretre.

PCR analiza razmaza omogućuje vam prepoznavanje patogena koji je otporan na određenu vrstu antibiotika. Osim toga, indikacije za ovu vrstu dijagnostičkog pregleda su:

• komplicirana trudnoća bez vidljivog razloga;
• akutni tijek spolne bolesti;
• sumnja na kronični tijek spolne bolesti;
• utvrđivanje uzroka neplodnosti ili spontanih pobačaja.

Analiza stolice

Test stolice pomoću lančane reakcije polimeraze propisuje stručnjak kako bi se utvrdila prisutnost infekcije. Priprema za uzimanje uzorka stolice za PCR je sljedeća:

• eliminirati laksative u obliku bilo kakvih čepića, ulja ili oralnih lijekova nekoliko dana;
• Dan prije nemojte konzumirati lijekove ili hranu koja stolici daje izrazitu boju.

Materijal za PCR određivanje najbolje je dostaviti u posebnom spremniku za stolicu sa štapićem. Unutrašnjost posude je sterilna pa se ne smije brisati niti prati. Prilikom uzimanja uzorka važno je paziti da ne dodirnete unutarnju površinu spremnika i u uzorku ne smije biti tragova urina. Prije odabira zabranjena je uporaba klistira.

Analiza urina

Ova PCR studija omogućuje ekstrakciju uzorka DNK virusa ili bakterije. Bolje je skupljati urin ujutro na prazan želudac. Najbolje je ako se to dogodi izravno u laboratoriju.

Obavezni uvjeti pripreme za dobivanje rezultata testa urina u laboratoriju za lančanu reakciju polimeraze:

• pričekajte 3 tjedna nakon uzimanja antibiotika;
• nemojte piti niti jesti prije prikupljanja tekućine;
• zabrana vaginalnog seksa jedan dan prije uzimanja uzorka;
• Prvu porciju materijala trebate staviti u posudu nakon buđenja.

Interpretacija rezultata

Dijagnostičke rezultate dešifrira stručnjak koji je pacijenta uputio na PCR test. Protokol koji izdaje laboratorij može uključivati ​​negativan ili pozitivan PCR rezultat:

• Negativno - slučaj u kojem nisu pronađeni djelići uzročnika navodne bolesti, odnosno osoba je zdrava i nije nedavno bolovala od ove bolesti.
• Pozitivna - RNA ili DNA patogena otkrivena je u uzorku i osoba treba liječenje.

Ne biste trebali sami tumačiti dobivene podatke, jer se dobne norme mogu značajno razlikovati, a različiti titri ukazuju na potpuno različite faze bolesti i pristupe terapiji.

Naoružani rezultatima PCR dijagnostike, liječniku će biti lako odrediti popis potrebnih mjera liječenja.

Točnost PCR dijagnostike učinila je ovu tehniku ​​nezamjenjivom u dijagnosticiranju ogromnog popisa bolesti i omogućila učinkovitije prepoznavanje i uklanjanje patogenih procesa koji se javljaju u ljudskom tijelu.

Lančana reakcija polimerazom (PCR) je metoda visoke preciznosti u području dijagnosticiranja nasljednih patologija, infekcija, virusnih bolesti u bilo kojoj fazi (akutnoj ili kroničnoj), kao i - u ranoj fazi - prije očitih manifestacija bolesti identificiranjem patogena na temelju njihove DNA, RNA, koji su genetski materijal, u uzorcima dobivenim od pacijenta. A danas ćemo govoriti o suštini, dijagnostičkim fazama i principima metoda lančane reakcije polimeraze (PCR), kao io njegovoj cijeni.

Što je lančana reakcija polimeraze

Osnova analize je amplifikacija (udvostručenje) - stvaranje velikog broja kopija iz kratkog dijela DNA (dezoksiribonukleinske kiseline), koji predstavlja ljudski genetski sklop. Studija zahtijeva vrlo malu količinu fiziološke tvari (ispljuvak, izmet, strugotine epitela, sok prostate, krv, sperma, amnionska tekućina, sluz, tkivo placente, urin, slina, pleuralna tekućina, cerebrospinalna tekućina). U ovom slučaju, na primjer, čak i jedan štetni mikrob može se otkriti u genitourinarnom traktu pacijenta.

Tehniku ​​PCR (lančana reakcija polimeraze) razvio je američki znanstvenik K. Mullis koji je 1993. godine dobio Nobelovu nagradu.

Aktivno korišteno:

• u ranoj dijagnozi infekcija, genetski;
• u sudsko-medicinskom vještačenju kada postoji iznimno mala količina DNK dostupna za ispitivanje;
• V veterinarska medicina, farmaceutika, biologija, molekularna genetika;
• za identifikaciju osobe pomoću DNK, potvrdu očinstva;
• u paleontologiji, antropologiji, ekologiji (pri praćenju kakvoće proizvoda, okolišnih čimbenika).

Ovaj video će vam detaljno reći što je lančana reakcija polimeraze:

Kome je propisano?

Lančana reakcija polimerazom u dijagnostici zaraznih bolesti jedna je od najpouzdanijih metoda osobite točnosti i pouzdanosti. Na primjer, pouzdanost PCR analize za klamidiju i mnoge druge patogene je blizu 100% (apsolutno). Najčešće se postupak lančane reakcije polimeraze propisuje pacijentima koji imaju poteškoća u identificiranju specifičnog patogena tijekom dijagnoze.

Laboratorijski PCR test se koristi:

• za otkrivanje patogena, izazivanje infekcije mokraćni i spolni organi koje je teško identificirati kulturom ili imunološkim metodama;
• za ponovnu dijagnozu HIV-a u početnoj fazi u slučaju pozitivnog, ali upitnog rezultata početnog testa (na primjer, u novorođenčadi od roditelja zaraženih AIDS-om);
• identificirati rak u ranoj fazi (proučavanje mutacija onkogena) i individualno prilagoditi režim liječenja za određenog pacijenta;
• u svrhu ranog otkrivanja i mogućeg liječenja nasljednih patologija.

Dakle, budući roditelji poduzimaju test kako bi saznali jesu li nositelji genetske patologije, kod djece PCR određuje vjerojatnost izloženosti bolesti koja se prenosi nasljeđem.

• za otkrivanje fetalnih patologija u ranim fazama gestacije (pojedine stanice rastućeg embrija ispituju se na prisutnost mogućih mutacija);
• u bolesnika prije transplantacije organa - za "tipizaciju tkiva" (određivanje kompatibilnosti tkiva);
• identificirati opasne patogene organizme u krvi davatelja;
• u novorođenčadi - identificirati skrivene infekcije;
• za procjenu rezultata antivirusnog i antimikrobnog liječenja.

Zašto se podvrgnuti takvom postupku?

Budući da je PCR vrlo učinkovita dijagnostička metoda koja daje gotovo 100% rezultate, koristi se postupak:

• potvrditi ili isključiti konačnu dijagnozu;
• brza procjena učinkovitosti terapije.

U mnogim slučajevima PCR je jedini mogući test za otkrivanje bolesti u razvoju ako su druge bakteriološke, imunološke i virološke dijagnostičke metode beskorisne.

• Virusi se otkrivaju PCR postupkom odmah nakon infekcije i prije nego što se pojave znakovi bolesti. Rano otkrivanje virusa omogućuje brzo liječenje.
• Takozvano “virusno opterećenje” (ili broj virusa u tijelu) također se utvrđuje analizom DNK kvantitativnom metodom.
• Specifični patogeni (npr. Kochov bacil tuberkuloze) su teški i predugo se kultiviraju. PCR testiranje omogućuje brzo otkrivanje minimalnog broja patogena (živih i mrtvih) u uzorcima pogodnim za testiranje.

Koristi se detaljna analiza DNK patogena:

• odrediti njegovu osjetljivost na određene vrste antibiotika, što omogućuje trenutno liječenje;
• suzbijanje širenja epidemija među domaćim i divljim životinjama;
• identificirati i pratiti nove zarazne mikrobne vrste i podtipove patogena koji su potaknuli prethodne epidemije.

Vrste dijagnostike

Standardna metoda

Analiza lančane reakcije polimerazom provodi se na temelju višestruke amplifikacije (udvostručenja) specifičnog fragmenta DNA i RNA pomoću posebnih enzima početnica. Kao rezultat lanca kopiranja dobiva se dovoljna količina materijala za istraživanje.

Tijekom postupka kopira se samo željeni fragment (koji odgovara specificiranim specifičnim uvjetima) i ako je stvarno prisutan u uzorku.

Ovaj detaljni video s korisnim dijagramima objašnjava kako radi PCR:

Ostale metode

• PCR u stvarnom vremenu. U ovoj vrsti istraživanja proces identifikacije određenog DNK fragmenta počinje nakon svakog ciklusa, a ne nakon završetka cijelog lanca od 30 - 40 ciklusa. Ova vrsta istraživanja omogućuje vam da dobijete informacije o količini patogena (virusa ili mikroba) u tijelu, odnosno izvršite kvantitativnu analizu.
• RT-PCR (način obrnute transkripcije). Ovaj se test koristi za traženje jednolančane RNA za otkrivanje virusa čija je genetska baza RNA (na primjer, virus hepatitisa C, virus imunodeficijencije). U ovoj studiji koristi se poseban enzim - reverzna transkriptaza a na temelju RNA izgrađena je specifična početnica i jednolančana DNA. Zatim se drugi lanac DNK izdvaja iz ovog lanca i izvodi se standardni postupak.

Indikacije za ispitivanje

PCR postupak se koristi u klinici za infektivne bolesti, neonatologiju, opstetriciju, pedijatriju, urologiju, ginekologiju, venerologiju, neurologiju, nefrologiju i oftalmologiju.

Indikacije za testiranje:

• određivanje rizika od razvoja genetskih abnormalnosti u djeteta s vjerojatnošću nasljednih patologija;
• dijagnosticiranje oba roditelja pri planiranju trudnoće ili u teškom stanju majke tijekom trudnoće;
• poteškoće s začećem, identificiranje uzroka neplodnosti;
• sumnja na spolno prenosive infekcije u akutnoj fazi i sa simptomima njihovog prijelaza u kronični;
• otkrivanje uzroka upalnih procesa nepoznatog podrijetla;
• nezaštićeni slučajni i redoviti seksualni kontakti;
• određivanje osjetljivosti patogenog mikroorganizma na specifične antibiotike;
• bolesnika sa sumnjom na latentnu infekciju za otkrivanje patogena prije razvoja očitih simptoma (pretklinička dijagnoza);
• pacijenata za potvrdu oporavka nakon bolesti (retrospektivna dijagnoza);:

Dijagnostika se također koristi ako je potrebno točno identificirati sljedeće patogene:

• virusi hepatitisa (A B C G), humana imunodeficijencija, citomegalovirus;
• Vibrio cholerae;
• herpes simplex virus, herpetiformne vrste;
• retro - adeno - i rinovirusi;
• rubeola, Epstein-Barr, varicella (Zoster) virusi;
• parvo i pikornovirusi;
• bakterija Helicobacter pylori;
• Legionela, patogene vrste Escherichia coli;
• Staphylococcus aureus;
• patogen;
• klostridija, difterija i hemofilus influenzae;

Također se koristi za određivanje infekcija:

• Infektivna mononukleoza;
• borelioza, listerioza, encefalitis koji prenose krpelji;
• kandidijaza uzrokovana gljivicama Candida;
• spolno prenosive infekcije - trihomonijaza, ureaplazmoza, treponema pallidum, gardnereloza, gonoreja, mikoplazmoza, klamidija;
• tuberkuloza.

Kontraindikacije za

Budući da se postupak ne provodi s pacijentom, bez utjecaja na tijelo, već s biološkim materijalom uzetim za istraživanje, nema kontraindikacija za PCR zbog nepostojanja potencijalne opasnosti.

Međutim, biomaterijal se ne prikuplja iz cervikalnog kanala maternice nakon postupka kolposkopije. Podnošenje razmaza i strugotina na analizu dopušteno je samo 4-6 dana nakon završetka menstruacije i potpunog prestanka iscjedka.

Je li metoda sigurna?

Nijedan Negativan utjecaj na pacijentu tijekom izoliranog proučavanja njegovog biomaterijala u laboratorijskim uvjetima je nemoguće.

Priprema za postupak (predaja bioloških supstanci na analizu)

Bilo koja biološka tekućina, tkivo ili tjelesni izlučevine služe kao uzorak za PCR analizu, koja otkriva DNK stranog patogena. Ispitna tvar se uzima u obliku uzimanja krvi iz vene, struganja iz grkljana, nosne šupljine, uretre, pleuralne šupljine, cerviksa.

Prije dijagnostičkog postupka liječnik objašnjava pacijentu koji će se materijal prikupiti:

1. Pri ispitivanju na spolno prenosive infekcije uzima se sekret iz spolnih organa, urin i bris iz mokraćne cijevi.
2. Kod analize na herpetičke infekcije, citomegalovirus, mononukleozu, uzima se urin i bris grla, za hepatitis, toksoplazmozu uzima se krv iz vene.
3. U dijagnostičke svrhe različite vrste Prikuplja se cerebrospinalna tekućina.
4. U pulmologiji uzorci za analizu su ispljuvak i pleuralna tekućina.
5. Prilikom provođenja studije mogućih intrauterinih infekcija tijekom trudnoće, amnionska tekućina i stanice posteljice koriste se za analizu.

Pouzdanost i točnost analize ovisi o sterilnosti uvjeta prilikom uzimanja materijala. Budući da je PCR testiranje vrlo osjetljivo, svaka kontaminacija ispitivanom tvari može iskriviti rezultat.

Kompetentna priprema za isporuku biomaterijala ne predstavlja nikakve poteškoće za pacijente. Postoje određene preporuke:

• pri analizi na spolno prenosive infekcije:
  • isključiti intimne kontakte 72 sata prije predaje materijala;
  • prestanite koristiti bilo kakve vaginalne proizvode 3 dana prije;
  • od večeri prethodnog dana nemojte provoditi higijenu područja koje se ispituje;
  • isključiti mokrenje 3-4 sata prije uzimanja uzorka iz uretre;
• prestati uzimati antibiotike mjesec dana prije testiranja na infekcije;
• krv se daje ujutro prije jela i pića;
• Prvi jutarnji uzorak urina prikuplja se u sterilnu posudicu nakon temeljite intimne toalete.

U nastavku pročitajte kako se provodi dijagnostika pomoću metode lančane reakcije polimeraze.

Kako funkcionira postupak?

Radeći PCR studije iznova i iznova u reaktoru (pojačivaču ili termocikleru) ponavljaju se određeni ciklusi:

1. Prvi korak je denaturacija. Slina, krv, biopsijski materijal, ginekološki uzorci, sputum, u kojima se sumnja na prisutnost DNA (ili RNA) patogena, stavljaju se u pojačivač, gdje se materijal zagrijava i DNA dijeli u dva odvojena lanca.
2. Drugi korak je žarenje ili lagano hlađenje materijala i dodajući mu početnice koji mogu prepoznati željene regije u molekuli DNA i vezati se na njih.
3. Treći korak je produljenje– javlja se nakon što su 2 početnice pričvršćene na svaki od DNA lanaca. Tijekom procesa dovršava se fragment DNK patogena i formira se njegova kopija.

Ti se ciklusi ponavljaju poput "lančane reakcije", svaki put dovodeći do udvostručenja kopija određenog fragmenta DNK (na primjer, segmenta u kojem je programiran određeni virus). Unutar nekoliko sati formiraju se mnoge kopije fragmenta DNK i detektira se njihova prisutnost u uzorku. Nakon toga se rezultati analiziraju i uspoređuju s podacima iz baze podataka različitih vrsta patogena kako bi se odredila vrsta infekcije.

U nastavku pročitajte o dekodiranju rezultata i zaključku na temelju PCR reakcije.

Dekodiranje rezultata

Konačni rezultat studije izdaje se 1-2 dana nakon predaje biološkog materijala. Često - već prvog dana nakon analize.

Kvalitativna analiza

• Negativan rezultat znači da u tvari predanoj na ispitivanje nisu pronađeni tragovi uzročnika infekcije.
• Pozitivan rezultat znači detekciju patogenih virusa ili bakterija u biološkom uzorku s vrlo visokim stupnjem točnosti u trenutku predaje materijala.

Ako je rezultat pozitivan, ali nema znakova povećane infekcije, ovo stanje tijela naziva se asimptomatskim "zdravim nosiocem". Najčešće se promatra prilikom uzimanja biomaterijala s određenog mjesta (cervikalni kanal, uretra, usna šupljina) kod virusnih bolesti. U ovom slučaju liječenje nije potrebno, ali je potreban stalni medicinski nadzor, jer postoji mogućnost:

• širenje virusa od nositelja i infekcija zdravih ljudi;
• aktivacija procesa i prijelaz bolesti u kronični oblik.

Međutim, ako je krvni test pozitivan, to znači da je infekcija pogodila tijelo, a to više nije nositelj, već patologija koja zahtijeva hitnu specifičnu terapiju.

Kvantitativna analiza

Kvantitativni rezultat određuje stručnjak posebno za određena vrsta infekcije. Na temelju njega moguće je procijeniti stupanj razvoja i stadij bolesti, što omogućuje pravovremeno propisivanje pravilnog liječenja.

Prosječna cijena

Cijene lančane reakcije polimerazom određuju: vrsta istraživanja, težina identifikacije uzročnika, težina prikupljanja biološkog materijala, vrsta analize (kvalitativna ili kvantitativna) i razina cijene u laboratoriju.

S druge strane, kada se proučava PCR, moguće je identificirati nekoliko patogena odjednom prilikom prikupljanja jedne vrste materijala za analizu. To vam omogućuje uštedu na drugim laboratorijskim pretragama.

Približni trošak PCR analize u rubljima:

• gonococcus, gardnerella, trichomonas vaginalis – od 180
• chlamydia trachomatis – od 190
• papiloma virus - od 380 do 500
• biocenoza urogenitalnog trakta kod žena (kvantitativna i kvalitativna procjena mikroflore) – od 800.

Još više korisna informacija u vezi s PCR studijom nalazi se u videu u nastavku:

Lančana reakcija polimerazom poznata je već 30 godina. Široko se koristi u mnogim područjima, od arheologije do genetike. Metoda PCR pomaže u utvrđivanju očinstva, ali najčešće se koristi za identifikaciju različitih zaraznih bolesti u ljudskom tijelu. Što je PCR analiza?

Ovo nije ništa drugo nego imitacija procesa reprodukcije DNA, uslijed čega se iz sićušnog fragmenta molekule DNA tijekom određenog vremenskog razdoblja (obično nekoliko sati) dobiva ogroman broj identičnih molekula, što već može biti studirao. Podsjeća li vas ovo na nešto? Vrlo slično kloniranju. Lančana reakcija polimeraze je osnova kloniranja i koristi se u reprodukciji tkiva u laboratoriju. Pa, u medicini se PCR analiza koristi za identifikaciju bakterija (mikoplazme, i patogena), virusa (i papiloma virusa), gljivica (patogena) i protozoa (Trichomonas) u ljudskom tijelu.

Ova metoda molekularne dijagnostike zaraznih uzročnika je najosjetljivija. Omogućujući otkrivanje čak i jednog fragmenta DNA u uzorku, PCR metoda praktički nema ograničenja osjetljivosti. I u većini slučajeva, njegov rezultat pokazuje 100% točnost, osobito kod dijagnosticiranja bakterijskih infekcija. Nikada ne daje lažno pozitivne rezultate.

Također je univerzalan, jer vam omogućuje da istovremeno identificirate nekoliko mikroorganizama u jednom uzorku, dok bakteriološke metode koriste različiti putevi uzgoj za različite skupine patogena. Osim toga, PCR značajno pojednostavljuje zadatak istraživača, skraćujući vrijeme za provođenje testa na 24 sata i pojednostavljujući zahtjeve za transport uzoraka. Ako materijal za bakteriološke i virološke metode mora biti živ, onda je za PCR metodu prikladno sve što sadrži DNA, čak i mrtve stanice.

PCR analiza za infekcije iznimno je važna jer se većina njih, utječući na ljudsko tijelo, razvija asimptomatski ili ima slične simptome. Na primjer, PCR metoda se naširoko koristi za identifikaciju uzročnika bolesti jetre, uključujući A, B, C, D, E, kao i herpes simplex virus. Za borbu protiv svakog virusa potrebno je koristiti potpuno različite taktike liječenja. Stoga, kako bi propisao učinkovitu terapiju, liječnik mora točno identificirati patogen. A ako se provode dugotrajna istraživanja, infekcija može postati kronična, uzrokujući komplikacije koje su posebno opasne tijekom trudnoće ili drugih popratnih bolesti. A upravo je PCR metoda glavni pomoćnik u brzoj i točnoj dijagnozi.

Ali ovdje morate shvatiti da, kao gotovo jedina metoda za identifikaciju nekih mikroorganizama (na primjer, mikoplazme), PCR može biti potpuno neprikladna za druge (stafilokoke, streptokoke, itd.) Stoga stručnjak mora odabrati dijagnostičke metode i propisati liječenje . Ne isplati se sami ići u laboratorij i raditi sve pretrage za redom. Može se pokazati da su potpuno beskorisni. A u privatnim klinikama, na vaš zahtjev i za vaš novac, obavit će vam bilo kakve pretrage, a da vas uopće ne pitaju zašto vam trebaju.

Kako napraviti PCR test

Za provođenje PCR studija koriste se biološke tekućine i izlučevine ljudsko tijelo, koji mogu sadržavati mikrobe i njihove fragmente. To uključuje: krv, slinu, ispljuvak i urin. Osim toga, za PCR analizu uzimaju se strugotine epitelnih stanica sluznice uretre i cervikalnog kanala. Na primjer, za otkrivanje virusa HIV-a i hepatitisa uzima se krv iz vene. Za dijagnosticiranje genitalnih infekcija analiziraju se genitalni iscjedak i bris iz cerviksa ili uretre. Za dijagnosticiranje infektivne mononukleoze koristi se bris grla.

Priprema za PCR analizu

Prije polaganja testa trebate se posavjetovati sa svojim liječnikom i pažljivo slijediti njegove preporuke. Pitajte liječnika koji će materijali biti uzeti za studiju. PCR test krvi se uzima na prazan želudac. Ali prije uzimanja PCR testa u obliku strugotina epitelnih stanica, liječnici preporučuju da pacijenti piju pivo navečer, odu u kupaonicu i imaju seks. Zvuči čudno, ali sve to aktivira infekciju u genitalijama, koja se može javiti u vrlo blagom obliku, i pomaže u njenom prepoznavanju.

Dešifriranje PCR analize

Rezultat PCR testa može biti pozitivan ili negativan. To se uvijek navodi u dokumentu koji mora izdati laboratorij. Pozitivan rezultat znači da je u biološkom materijalu koji je donirao pacijent otkriven DNK infekcije. Negativan rezultat znači da u ljudskom tijelu nema infekcije.

Budući da je PCR metoda vrlo osjetljiva, treba je koristiti za praćenje učinkovitosti liječenja vrlo pažljivo i tek nekoliko tjedana nakon terapije. Uostalom, čak i fragment DNK mrtvog patogena dat će pozitivan rezultat PCR testa.

Lančana reakcija polimerazom pomaže liječnicima u dijagnosticiranju infekcija koje se javljaju u ljudskom tijelu u latentnom obliku, sprječavajući njihov razvoj i teška oštećenja unutarnji organi. Pažljivo pratite svoje zdravlje i pri prvoj sumnji na infekciju obratite se liječniku.

U većini slučajeva pacijenti se moraju suočiti sa situacijom u kojoj je potrebna PCR dijagnostika za ispitivanje ili utvrđivanje bolesti. Važno je razumjeti što je to i zašto je potrebno.

Metoda lančane reakcije polimerazom (PCR) je test koji pomaže u prepoznavanju mnogih bolesti u početne faze razvoj. Njegova bit je pronaći DNA ili RNA patogena prisutnog u tijelu. PCR vam omogućuje određivanje patogena u slučajevima kada su druge vrste istraživanja neučinkovite.

Popularnost ovu metodu je jednostavnost i širina upotrebe. Kliničari ga koriste za dijagnosticiranje raznih bolesti. Omogućuje brzo provođenje složenih kvantitativnih i genomskih studija.

Jedna od najvažnijih medicinskih primjena klasične PCR metode je detekcija mikroorganizama koji mogu izazvati patološka stanja.

Suština PCR analize

PCR dijagnostika (što je to objašnjava molekularna biologija) je metoda molekularnog kloniranja kojom se analizira kratka sekvenca DNA koja je prisutna u minimalnim količinama u uzorcima koji sadrže bilo kakav genetski materijal. Ova metoda se često naziva "stroj za kopiranje DNK".

PCR dijagnostika provodi se in vitro (izvan tijela) u laboratoriju i temelji se na prirodnom procesu udvostručenja DNK prije njezine diobe. Osim mogućnosti otkrivanja virusa, bakterija ili drugih mikroorganizama u uzorku, PCR omogućuje određivanje njihove količine.

Za bolesti kao što su virus hepatitisa C ili virus humane imunodeficijencije (HIV), virusno opterećenje je dobar pokazatelj gdje se nalazi bolest i koliko je učinkovita terapija.

Naoružani ovim informacijama, liječnici mogu odrediti kada započeti liječenje i pratiti proces. To nam omogućuje stvaranje individualnog pristupa svakom pacijentu.

PCR dijagnostika uključuje tri faze, u svakoj od kojih se količina ciljne DNA značajno povećava. Kao rezultat ove reakcije dobiva se više od jedne milijarde kopija izvorne ili "ciljane" DNK, što omogućuje procjenu prisutnosti virusa u tijelu. Ovo je glavno svojstvo PCR metode.

Prednosti i nedostaci metode

PCR dijagnostiku (što je to gore opisano) detaljno je opisao Keri Mullis 1983. godine. Od tada je metoda iznimno popularna u laboratorijskoj praksi.

Glavne prednosti ove vrste istraživanja su:

• svestranost;
• brzina rezultata;
• velika vjerojatnost dobivanja pouzdanih rezultata;
• specifičnost;
• razne bolesti koje se mogu identificirati.

Svestranost PCR metode leži u mogućnosti korištenja bilo kojeg ljudskog fiziološkog materijala. Za analizu je dovoljna i jedna dlaka.

Proces obrade podataka, zahvaljujući automatizaciji, može trajati nekoliko sati. Specifičnost se sastoji u izdvajanju određenog fragmenta DNA karakterističnog za određeni patogen. Pomoću PCR analize mogu se dijagnosticirati mnoge bolesti, kako u akutnom tako iu latentnom stadiju.

No, unatoč velikom broju prednosti, PCR dijagnostička metoda ima i nedostatke:

• vjerojatnost lažno pozitivnih rezultata;
• visoka osjetljivost;
• varijabilnost mikroorganizama.

Glavni nedostatak metode je nemogućnost PCR-a da razlikuje žive mikroorganizme od mrtvih. U pravilu se radi o situaciji u kojoj treba procijeniti uspješnost liječenja. U tom slučaju, ako je bolest liječena, tada mrtve stanice ostaju u ljudskom tijelu neko vrijeme, a za njihovu potpunu obnovu potrebno je neko vrijeme od 4 do 6 tjedana.

Visoka osjetljivost je prednost i istovremeno nedostatak. Neki mikroorganizmi prisutni su u malim količinama u tijelu. Stoga, u ovom slučaju, ova dijagnostička metoda nije informativna, te se preporuča koristiti druge vrste istraživanja.

Svaki mikroorganizam može mutirati. I iako proces amplifikacije koristi određeni fragment koji je najmanje podložan promjenama, on još uvijek može dobiti mutacije i postati nevidljiv testnom sustavu. Ova situacija objašnjava činjenicu da različiti sustavi laboratorijskih ispitivanja mogu pokazati potpuno različite rezultate.

U kojim područjima se metoda koristi?

PCR testiranje može se koristiti u kliničkoj praksi za prepoznavanje raznih bolesti. Naširoko se koristi u ginekologiji, urologiji, gastroenterologiji, onkologiji itd. Osim toga, učinkovito se koristi u forenzičkoj znanosti za utvrđivanje identiteta i utvrđivanje očinstva.

Ova vrsta studije koristi se u fazi planiranja i tijekom trudnoće. Analiza na TORCH infekcije provodi se kako bi se otkrila prisutnost infekcije u tijelu žene. Bolesti uzrokovane jednom od infekcija mogu biti blage za ženu, ali uzrokuju ozbiljne urođene mane fetusa, uključujući i njegovu smrt.

Također, PCR dijagnostička metoda pomaže u određivanju genetske predispozicije osobe za razvoj određenih bolesti u budućnosti.

Koje se infekcije mogu otkriti PCR dijagnostikom?

PCR metoda pomaže identificirati viruse, bakterije i gljivice.

Najčešće bolesti koje se mogu dijagnosticirati pomoću njega:

Koji biološki materijali se proučavaju?

Uzimajući u obzir bolest, simptome i ciljeve studije, PCR dijagnostika može koristiti bilo koju fiziološku tekućinu ili česticu tkiva.

To bi mogao biti:

• krv;
• slina;
• sputum;
• urin;
• izmet;
• orofaringealni bris;
• komad zahvaćenog tkiva;
• sinovijalna tekućina;
• struganje iz vagine kod žena ili iz uretre kod muškaraca;
• ejakulirati;
• kosa i drugi.

Za bolesti genitourinarnog sustava uzima se urin ili bris iz vagine kod žena ili iz mokraćne cijevi kod muškaraca. Venska krv se daruje za dijagnostiku bolesti kao što su HIV, hepatitis različite vrste, TORCH infekcije.

Kako bi se isključila ili potvrdila onkologija, tijekom kirurških intervencija uklanjaju se komadići tkiva za biopsiju.

Kako se pripremiti za analizu

Značajke pripreme za istraživanje ovise o biomaterijalu koji se predaje. Također treba zapamtiti da je potrebno izbjegavati uzimanje antibiotika i drugih lijekova. Za praćenje učinkovitosti liječenja, interval nakon uzimanja lijekova treba održavati najmanje 4 tjedna.

Krv se daje ujutro natašte. Urin i izmet moraju se staviti u za to predviđenu, potpuno sterilnu posudu. Istodobno, prije prikupljanja urina, potrebno je provesti higijenu vanjskih genitalija.

Ako idete na test razmaza, morate:

• nemojte mokriti 3 sata;
• Ne preporučuje se pranje i ispiranje dan prije (za žene);
• prekinuti seksualnu aktivnost dan prije;
• Žene bi trebale napraviti bris sredinom ciklusa.

Faze PCR istraživanja

Prije početka PCR-a, DNK se mora izdvojiti iz uzorka. Ekstrakcija DNK je proces u više koraka koji se može izvesti ručno ili instrumentalno.

Nakon što je uzorak pripremljen, počinje PCR proces u tri koraka:

• odvajanje ciljne DNA (denaturacija);
• amplifikacija (reprodukcija) fragmenata DNA;
• otkrivanje (detekcija) amplificiranih fragmenata DNA.

Prva faza PCR-a naziva se denaturacija. Njegova suština je da se epruveta s uzorcima DNK zagrijava do visoke temperature(otprilike 90 stupnjeva). Zbog visokih temperatura uništavaju se slabe veze između nukleotida koje tvore kod molekula. To rezultira cijepanjem dvolančane DNA ili RNA u dva odvojena lanca.

Za "čistoću" studije, biomaterijalu koji se proučava dodaje se posebna otopina koja otapa organske tvari. Trajanje ove faze ovisi o vrsti materijala koji se testira i uzročniku infekcije.

PCR dijagnostika (što je to opisano je gore) u drugoj fazi reproducira fragmente DNK na temelju DNK same infekcije. PCR ne kopira svu nukleinsku kiselinu u uzorku. Kopira samo poseban niz genetski kod, kratki ulomak (bukvar).

U drugoj fazi epruveta se hladi. Cijeli PCR proces automatiziran je pomoću stroja koji se naziva termostat ili cikler i može se dovršiti u roku od nekoliko sati. PCR stroj je programiran da mijenja temperaturu reakcijske smjese svakih nekoliko minuta. To se događa tako da se kratki fragmenti mogu vezati za jednolančani predložak.

Amplifikacija se događa u 30-40 ciklusa. U tom razdoblju laboratorijski liječnik kopira fragment DNA i povećava njegovu količinu metodom lančane reakcije. Tako se svakim ciklusom broj kopija povećava na nekoliko milijuna ili čak milijardi.

U trećoj fazi studije otkriva se prisutnost DNK virusa i bakterija. To se radi tako da se dobivena smjesa rasporedi i u nju doda posebna otopina. Ova tekućina omogućuje fragmentima DNK da dobiju određenu boju pod utjecajem ultraljubičastih zraka. To je pokazatelj da su u ljudskom tijelu prisutni patogeni mikrobi.

PCR tijekom trudnoće

PCR dijagnostika (ono što je gore opisano) može se propisati prvi put tijekom trudnoće, jer je to obavezan postupak. Ova metoda pomaže identificirati skrivene infekcije i rizik od razvoja nedostataka u fetusu.

Za provođenje analize koristite:

Postoje zarazne bolesti koje mogu negativno utjecati na razvoj fetusa, uzrokujući nedostatke, uzrokujući prijevremeni porod i pobačaje. Posebno su opasni u prvom tromjesečju trudnoće i u većini slučajeva medicinska su indikacija za prekid trudnoće. Te se infekcije zajednički nazivaju TORCH kompleks.

PCR analiza pomaže u određivanju prisutnosti ili odsutnosti infekcije u tijelu trudnice. Često se izvodi u fazi planiranja trudnoće ili u prvom tromjesečju. Ako je rezultat pozitivan potrebno je ponoviti test. I tek nakon potvrde rezultata, propisano je odgovarajuće liječenje.

PCR za dijagnostiku HIV-a

PCR metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije skupa je pretraga i koristi se prema posebne indikacije. To uključuje i donaciju, a može se prepisivati ​​i pacijentima ozlijeđenima u prometnoj nesreći s osobama koje nose HIV.

PCR pomaže u određivanju prisutnosti infekcije na rani stadiji prije nego što tijelo proizvede antitijela na HIV. Rezultat sa visok postotak Studija može pokazati vjerojatnost unutar 5-14 dana nakon ulaska virusa.

U drugim slučajevima, prisutnost virusa u ljudskom tijelu pomaže uspostaviti enzimski imunološki test (ELISA). Otkriva antitijela na HIV u krvi osobe, koja se počinju proizvoditi 1-3 mjeseca nakon infekcije. Kvantitativno određivanje i analiza mikroorganizama neophodna je za praćenje liječenja bolesnika.

PCR za dijagnosticiranje hepatitisa

Virusni hepatitis C je ozbiljna bolest koja može dovesti do razvoja ciroze jetre. Tijekom razdoblja inkubacije, koje može trajati i do 12 mjeseci, virus se nikako ne manifestira, bolesnik praktički nije zarazan, a virus se ne može otkriti rutinskom analizom krvi.

Najčešće, ako se ne liječi na vrijeme, bolest postaje kronična i prijeti višestrukim komplikacijama.

Kada se zarazi hepatitisom B, razdoblje inkubacije nije tako dugo, a prvi simptomi mogu se primijetiti nakon 4 tjedna. U tom razdoblju ELISA može pokazati prisutnost virusa u tijelu.

PCR metoda omogućuje:

• identificirati bolest u fazi razvoja inkubacije;
• riješiti upitne analize drugih studija;
• procijeniti učinkovitost antivirusne terapije.

Odsutnost DNA virusa hepatitisa nakon tretmana znak je njegove učinkovitosti.

Test na tuberkulozu

Razvoj tuberkuloze izaziva Kochov bacil, koji može ući u ljudsko tijelo kapljicama u zraku. Bolest ima dva oblika: skriveni i otvoreni. U prvom slučaju, zaražena osoba nije nositelj infekcije i mikobakterije u ispljuvku se ne otkrivaju čak ni pomoću PCR-a. Ovaj oblik je još uvijek opasan, jer je sposoban ući u otvorenu pozornicu.

Otvorena (aktivna) faza predstavlja opasnost za druge čak i ako se strogo poštuju pravila osobne higijene. Za dijagnosticiranje bolesti koriste se fluorografija, tomografija i x-zrake. prsa. Također se u tu svrhu koristi tuberkulirani kožni test (Mantoux test). Ali većina učinkovita metoda istraživanje je PCR.

Kao ispitni uzorci koriste se sljedeći uzorci:

• krv;
• sputum;
• bronhijalna tekućina.

PCR za dijagnosticiranje HPV-a

Dijagnoza HPV-a provodi se u prisutnosti simptoma bolesti kao što su papilomi i bradavice na genitalnom području. Također, studija se propisuje u fazi planiranja trudnoće, u slučaju neplodnosti, pobačaja, kao iu slučaju infekcije jednog od partnera, budući da je jedan od mehanizama prijenosa virusa spolni.

Najopasnija stvar nije prisutnost virusa u tijelu, već njegova vrsta. Neki njegovi tipovi (16 i 18) visoko su onkogeni i mogu uzrokovati rak vrata maternice kod žena. PCR metoda može se propisati zajedno s drugim vrstama istraživanja. Za analizu se najčešće koristi bris iz genitalnih organa. Krv, urin i vaginalni iscjedak se izuzetno rijetko koriste kao biomaterijali.

Za herpes

Ovaj test dijagnosticira genitalnu infekciju virusom herpes simplex tipa 1 i 2 (HSV1/HSV2). Ako je rezultat HSV2 pozitivan, trebate se testirati na HIV i druge spolno prenosive bolesti. Za analizu je potrebna venska krv pacijenta.
Urin, sekret i sadržaj osipa također se mogu ispitati ako su prisutni simptomi.

Sveobuhvatni PCR pregled

Ako je indicirano ili u svrhu prevencije bolesti, može se propisati niz PCR testova. Najčešće je inicijator sam pacijent, postoje slučajevi kada je propisan sveobuhvatan pregled kako bi se spriječilo izbijanje određenih bolesti u određenoj regiji.

PCR-12 je sveobuhvatna studija koja pokriva sljedeće infekcije:

1. Hepatitis.
2. Herpes.
3. STD.
4. Tuberkuloza.
5. Encefalitis.
6. Kandidijaza.
7. Infekcija Helicobacter pylori.
8. Citomegalovirus.
9. Mononukleoza.
10. Onkovirusi.
11. Listerioza.

Objašnjenje PCR analize

Nakon analize PCR metodom može se objaviti pozitivan ili negativan rezultat.

Rezultati PCR dijagnostike izgledaju ovako. Liječnik će vam reći što je to i kako ga dešifrirati

Točnost PCR dijagnostike

U većini slučajeva PCR dijagnostika daje vrlo točne rezultate. Ali u nekim slučajevima potrebne su dodatne metode istraživanja kako bi se potvrdila točna dijagnoza.

Što bi moglo uzrokovati lažni rezultat?

Lažno pozitivni rezultati mogu biti posljedica nepoštivanja pravila prikupljanja analize i provođenja samog postupka istraživanja.

Sam pacijent može biti krivac lažnih informacija u slučaju neadekvatne pripreme za isporuku biomaterijala. Oprema laboratorija i profesionalnost liječnika mogu izravno utjecati na rezultate studije.

Gdje dobiti PCR dijagnostiku

PCR dijagnostika provodi se u privatnim klinikama i laboratorijima po nalogu liječnika ili na inicijativu samog bolesnika u svrhu prevencije.
Prednost treba dati klinikama i laboratorijima sa suvremenom opremom koji su na medicinskom tržištu već nekoliko godina i dokazali su se.

PCR analiza: cijena i vrijeme

Ova dijagnostička metoda je skupa. Cijena mu se kreće od 200 do 500 rubalja za svaku vrstu. Sveobuhvatni pregled na prisutnost nekoliko infekcija može znatno uštedjeti u usporedbi s plaćanjem svakog pojedinačnog pregleda.

Trajanje studije ovisi o vrsti infekcije i može trajati od 1 do 5 dana. Također, ovi pokazatelji ovise o opremljenosti laboratorija i kvalifikacijama medicinskog radnika.

PCR dijagnostika (što je to, detaljno je opisano u ovom članku) je najtočnija i najbrža metoda istraživanja. To je jedno od najvažnijih otkrića u 20. stoljeću. u medicini.

Zahvaljujući ovoj metodi postalo je moguće potpuno izlječenje mnogih bolesti. Ali ne treba zaboraviti da PCR također ima neke nedostatke, a njegova se učinkovitost ponekad povećava zajedno s korištenjem drugih metoda istraživanja.

Format članka: Vladimir Veliki

Video o PCR dijagnostici

O točnosti PCR-a:

U moderna medicina PCR analiza bioloških tekućina tijela vrlo je precizna i informativna. Pomoću ove analize otkriva se prisutnost virusnih i mikrobnih čestica u tijelu, čak i ako je bolest skrivena i ne daje nikakve simptome.

Što znači propisati vam PCR test? Ova kratica označava metodu lančane reakcije polimeraze - to je poseban način izvođenja laboratorijska istraživanja. Ovom metodom biološki materijal dobiven od pacijenta stavlja se u poseban aparat. Skup reagensa enzima dodaje se testnom mediju, koji pomaže u reprodukciji genetskog materijala patogena (virusa ili mikroba). Reakcija proizvodi veliki broj kopija DNA ili RNA, što omogućuje identifikaciju usporedbom s bazom podataka virusnih i mikrobnih infekcija.

Što znači rezultat PCR testa? Ako postoji uzročnik bilo koje infekcije u ljudskom tijelu, čak i skrivene, ova analiza će otkriti ne samo njegovu prisutnost, već iu kojoj količini je ta infekcija prisutna u tijelu.

Za testiranje na infekcije metodom PCR možete pregledati sve biološke tekućine u tijelu - krv, urin, slinu, genitalni sekret, sluz grla i nosa. Za analizu je potrebno vrlo malo materijala, jer ako su uzročnici prisutni, reprodukcijom njihovih kopija koncentracija genetske informacije se dovodi na toliku razinu da će mikrob ili virus identificirati i odrediti njegovu vrstu. Točnost PCR analize je vrlo visoka, uz pomoć ove analize danas je moguće odrediti gotovo sve raširene virusne, mikrobne i druge infekcije.

No, što PCR analiza najčešće otkriva? Na popisu infekcija koje se mogu otkriti ovom metodom nalaze se zarazne, uključujući i društveno opasne infekcije poput tuberkuloze ili hepatitisa B i C. Ista metoda može otkriti HIV infekciju, infekcije klamidijom i ureaplazmom, mikoplazmozu dišnog sustava i spolnih organa. Pomoću ove analize otkrivaju se drozd, bakterijska vaginoza i trihomonijaza. Mogućnosti ove metode omogućuju prepoznavanje skrivenih infekcija - različite vrste herpesa, HPV (papiloma virus), kao i prepoznavanje posebnog mikroba odgovornog za razvoj čira na želucu - Helicobatera.

Danas PCR test možete napraviti u gotovo svakom privatnom ili javnom laboratoriju. Ove vrste testova rade se na svima, djeci i odraslima. Ovisno o svrsi analize, analizira se različit biološki materijal ovisno o spolu.

Tako se PCR analiza kod muškaraca provodi na krvi ili urinu, uretralnim sekretima, sluzi iz grla ili nosa, soku prostate ili čak spermi. PCR analiza kod žena moguća je u krvi i urinu, vaginalnom sekretu, uretralnom iscjetku, sluzi iz nosa i ždrijela.

Tijekom trudnoće vrlo se često koristi PCR analiza, pomoću koje se u vaginalnom sekretu ili krvi otkrivaju skrivene infekcije koje zahtijevaju posebno praćenje u tom razdoblju, a ponekad i odgovarajuće liječenje.

Kako se uzima PCR?

Test infekcije ovom metodom propisuje liječnik; često se materijal prikuplja odmah u liječničkoj ordinaciji - urologu ili ginekologu. Kako se radi PCR analiza?

Materijal koji se proučava miješa se s reagensima u laboratoriju i čeka se reakcija. Kada su patogeni prisutni, kopije njihove DNA ili RNA se umnožavaju. Uređaj uspoređuje identificirane fragmente genetskog materijala s bazama podataka i točno identificira uzročnika infekcije. Po potrebi se naznači i količina uzročnika u određenim tjelesnim tekućinama. Tipično, studija traje ne više od 1-2 dana, ako je potrebno, provode se ekspresni testovi.

Gdje dobivate PCR analizu? To će ovisiti o vrsti patogena za koju se sumnja. Ako se radi o HIV-u ili hepatitisu, uzima se krv, ako se radi o spolno prenosivim infekcijama uzima se bris iz uretre ili rodnice. Ako se sumnja na mononukleozu ili herpes, uzima se bris grla. Može se koristiti i urin, likvor, iscjedak iz rana, ispljuvak itd.

PCR test krvi

Za točne rezultate i dijagnozu infekcija važno je darovati krv jutarnji sati Na prazan želudac. Test krvi pomoću PCR-a može identificirati patogene opasne bolesti- HIV, hepatitis, sifilis. U razdobljima pogoršanja i aktivnosti virusa, herpes virusi, papilomi i neki drugi mogu se otkriti u krvi.

PCR analiza: priprema

Za apsolutnu točnost analize važna je pravilna priprema za nju. Najlakši način da se pripremite za analizu krvi je da nema ograničenja u prehrani ili aktivnosti, krv se mora uzeti ujutro, natašte. Urin se uzima nakon pranja spolovila, iz srednjeg dijela u posebnu sterilnu posudu. PCR analiza iz genitalnog trakta zaslužuje posebna pažnja, pa je važno znati kako se pripremiti. Dan prije pregleda zabranjen je spolni odnos, preporuča se ne mokriti prije pregleda. Tijekom menstruacije kod žena, datum analize odgađa se za 3-5 dana od trenutka posljednjeg pražnjenja.

Koliko dugo traje PCR test?

Ovisno o mogućnostima laboratorija analiza se može pripremati od nekoliko sati do nekoliko dana. Koliko dana u prosjeku traje PCR test? Obično je to jedan ili dva dana. Na hitna situacija analiza se može izvršiti isti dan, za nekoliko sati.