Analisis PCR untuk 5 infeksi. Analisis PCR adalah tes infeksi yang paling akurat. Metode PCR memungkinkan

Untuk pengobatan yang paling berhasil poin penting adalah diagnosis yang cepat dan bebas kesalahan. DI DALAM Akhir-akhir ini Daftar metode dan kemampuan pusat diagnostik, klinik dan rumah sakit di bidang diagnostik terus bertambah. Setelah munculnya teknik yang relatif baru - analisis PCR, metode ini dengan cepat mendapatkan penganut di kalangan pekerja medis, karena seringkali sangat diperlukan dalam mengidentifikasi penyakit menular.

Ruang lingkup penerapan metode berdasarkan reaksi berantai polimerase tidak terbatas pada pengobatan, tetapi diagnostik PCR telah mendapatkan distribusi terbesar untuk mengidentifikasi berbagai penyakit.

Keunggulan PCR yang tidak dapat disangkal adalah sebagai berikut:

Sensitivitas yang sangat tinggi. Biasanya mereka berbicara tentang sensitivitas dari 95 hingga 100%, tetapi ini adalah data rata-rata. Indikator ini berbeda untuk mikroorganisme yang berbeda. Jadi, untuk hepatitis C tidak pernah lebih rendah dari 97% (asalkan semua persyaratan terpenuhi), dan untuk menentukan ureaplasmosis - tidak kurang dari 99%. Sensitivitas ini adalah yang tertinggi saat ini, sehingga metode ini hampir tidak memiliki pesaing dalam hal karakteristik ini.
Kemungkinan penggunaan pada tahap paling awal. Pada saat metode diagnostik lain belum dapat mengidentifikasi patogen karena jumlahnya yang sedikit dalam sampel, PCR sudah memberikan hasil yang benar. Kehadiran patogen dapat dideteksi bahkan dengan adanya satu spesimen, dan dalam beberapa kasus, hanya sebagian dari mikroba. Oleh karena itu, metode ini juga digunakan untuk patologi kronis atau laten, serta pada tahap inkubasi.
Berbagai macam hasil. Analisis ini mampu mengidentifikasi beberapa patogen secara bersamaan, tidak memerlukan manipulasi berulang. Kadang-kadang ada kemungkinan untuk menemukan patogen yang bahkan tidak diperkirakan pada diagnosis awal.
Fleksibilitas sampel. Sampelnya bisa berupa sampel darah, air liur, dahak, rambut, keputihan, dan sel dari berbagai jaringan.
Kecepatan memperoleh hasil. Dalam kebanyakan kasus, jawabannya diterima dalam waktu 5-6 jam. Untuk pengujian kultur yang mendekati reaksi berantai polimerase dalam hal akurasi, hasil yang sama dapat diperoleh dalam beberapa hari hingga beberapa minggu.
Penentuan kuantitatif patogen. Parameter ini memungkinkan Anda menentukan titer mikroba dalam suatu bahan, dan properti ini seringkali diperlukan untuk menilai efektivitas taktik pengobatan yang dipilih.
Identifikasi mikroorganisme itu sendiri, dan bukan penentuan reaksinya. Sebagian besar analisis didasarkan pada respons patogen terhadap reagen kimia, pewarnaan, dll. Metode diagnostik ini memungkinkan Anda mendeteksi mikroba secara langsung, dan bukan tanda tidak langsung, antibodi, dll.

Meskipun memiliki banyak kelebihan, metode ini juga memiliki beberapa kelemahan:

Deteksi mikroorganisme yang salah dapat terjadi karena kontaminasi sampel dari sampel sebelumnya. Hal ini terjadi ketika instrumen atau reagen yang terlibat dalam analisis terkontaminasi. Bahkan di udara pun terdapat pecahan mikroba yang dapat mempengaruhi hasil, sehingga di laboratorium tersebut harus dipasang filter biologis dengan tingkat pemurnian udara maksimal.
Hasil negatif palsu. Bahkan dengan semua manifestasi penyakit yang jelas, data negatif terkadang diperoleh. Penyebabnya adalah lokasi pengambilan sampel yang salah, sehingga petugas laboratorium harus memiliki kualifikasi, pengetahuan, dan pengalaman yang memadai.
Data harus dievaluasi secara eksklusif oleh dokter yang merawat, karena interpretasi hasil analisis PCR merupakan proses yang kompleks. Respon positif tidak selalu berarti sakit. Faktanya adalah setelah penyakit ini berhasil diobati, fragmen patogen tetap ada di dalam darah untuk waktu yang lama, sehingga hanya spesialis yang sangat berkualifikasi yang dapat menarik kesimpulan.
Tingginya biaya diagnostik menggunakan reaksi berantai polimerase. Harga tersebut disebabkan oleh peralatan yang mahal dan persyaratan yang tinggi terhadap kondisi laboratorium dan kualifikasi personel.

Syarat wajib mendapatkan data akurat di laboratorium PCR:

mekanisme pengumpulan sampel yang benar dan pengangkutannya yang benar ke laboratorium;
kepatuhan yang ketat terhadap metode selama analisis;
sterilitas tinggi dan otomatisasi proses yang maksimal;
penggunaan instrumen sekali pakai;
sistem pengendalian laboratorium internal untuk memastikan keandalan data.

Asalkan semua persyaratan terpenuhi, berdasarkan data yang diperoleh dengan menggunakan teknik PCR, dimungkinkan tidak hanya untuk menentukan penyakitnya, tetapi juga untuk membuat prognosis perjalanan penyakitnya dan membuat algoritma pengobatan.

Inti dari metode ini

Reaksi berantai polimerase memungkinkan Anda dengan cepat menyalin dan mereproduksi rantai DNA mikroba penyebab penyakit. Agar proses dapat berjalan cepat, digunakan sediaan enzim khusus yang mempercepat replikasi dan pembangunan rantai nukleotida.

Setelah prosedur selesai, keberadaan patogen dalam sampel meningkat jutaan kali lipat, setelah itu deteksi dan identifikasi tidak menjadi masalah.

Teknisi laboratorium dapat membandingkan sampel yang dihasilkan dengan yang disajikan dalam database dan memberi nama secara akurat, serta menentukan jumlah aslinya.

Selain itu, teknik ini memungkinkan Anda untuk mengkloning bagian-bagian tertentu dari rantai DNA, menyebabkan mutasi yang diperlukan di dalamnya, dan menggabungkan serta menggabungkan bagian-bagian tersebut satu sama lain.

Area aplikasi

Diagnostik PCR paling banyak digunakan dalam pengobatan. Dengan bantuannya, Anda dapat mengidentifikasi penyakit virus, infeksi, keturunan, dan ini dapat dilakukan tidak hanya pada fase aktif, tetapi juga segera setelah infeksi.

Bidang kedokteran di mana metode PCR digunakan secara aktif untuk diagnosis:

urologi dan ginekologi - untuk mendeteksi sebagian besar penyakit menular seksual (ureaplasmosis, herpes, sifilis, gonore, gardnerellosis, trikomoniasis, klamidia, HIV, mikoplasmosis, human papillomavirus, kandidiasis, dll.);
pulmonologi - untuk tuberkulosis atau pneumonia yang bersifat bakteri atau virus;
gastroenterologi - untuk helicobacteriosis;
dalam hematologi - dengan sitomegalovirus, berbagai oncovirus darah;
di bidang penyakit menular - untuk mendeteksi difteri, salmonellosis, mononukleosis, listeriosis, hepatitis yang berasal dari virus, ensefalitis;
dalam onkologi - untuk menentukan kanker payudara, leukemia, limfoma.

Metode ini juga digunakan dalam neonatologi, pediatri, oftalmologi, neurologi - di hampir semua cabang kedokteran, metode ini terbukti diperlukan.

Video tersebut menjelaskan secara rinci infeksi mana yang dapat dideteksi menggunakan reaksi berantai polimerase.

Sebagian besar penyakit menular seksual didiagnosis dengan cepat dan berhasil berkat diagnostik PCR. Selain mengidentifikasi patogen, metode ini memungkinkan Anda mengetahui strain spesifik mikroorganisme, sehingga memungkinkan untuk memilih obat yang paling efektif untuk pengobatan.

Selain pengobatan, metode PCR juga digunakan di bidang lain:

Forensik dan Kedokteran Forensik - Membantu mengidentifikasi penjahat dengan membandingkan materi genetik tersangka dengan sampel yang ditemukan di TKP.
Menetapkan ayah - kumpulan genetik yang dikalikan dari orang tua dan anak dibandingkan, fragmen yang identik ditemukan, yang menjadi dasar seseorang dapat menilai tingkat kekerabatan mereka.
Sains menggunakan metodologi selama eksperimen menggunakan mutasi gen, membangun hubungan cabang evolusi organisme individu, dll.

Diagnostik PCR dalam venereologi

Banyak infeksi yang menyebabkan penyakit kelamin, pada tahap awal sangat mirip manifestasi dan gejalanya, sehingga cukup sulit untuk membedakannya. Pada saat yang sama, identifikasi dini agen infeksi memungkinkan pengobatan dimulai sedini mungkin dan waktu pengobatan dikurangi seminimal mungkin, menghindari berkembangnya kemungkinan komplikasi.

Reaksi berantai polimerase adalah mekanisme yang efektif untuk mengidentifikasi kelompok penyakit genital berikut:

infeksi bakteri (sifilis, donovanosis, gonore, klamidia, dll);
patologi virus (papillomatosis, condylomatosis, HIV, herpes genital, dll.);
jamur (sariawan, balanoposthitis, dll.)

Dalam dermatovenereologi, kemampuan teknik ini untuk menemukan agen infeksi selama periode remisi atau selama pengangkutan, ketika seseorang dapat menulari pasangannya tanpa menunjukkan gejala penyakit, sangat berguna.

Kemajuan analisis reaksi berantai polimerase

Analisis PCR terjadi dalam 4 tahap utama:

menyiapkan bahan untuk disalin;
menggabungkan fragmen DNA dan primer;
menyalin kumpulan genetik dari materi yang dipelajari;
identifikasi dan evaluasi set DNA yang dihasilkan.

Tahap 1

Sampel dipanaskan hingga suhu 94-98°C dalam perangkat khusus - thermal cycler, yang diprogram untuk mempertahankan suhu yang tepat dengan kesalahan rendah. Suhu yang disetel dipertahankan selama satu atau dua menit. Hal ini diperlukan untuk mendenaturasi DNA sehingga heliks ganda terpisah menjadi dua untai terpisah.

Tahap 2

Suhu dalam thermal cycler diturunkan menjadi 72-75°C sehingga primer dapat mengenali bagian rantai DNA yang serupa dan bergabung dengannya.

Primer adalah reagen khusus yang hanya cocok untuk satu jenis patogen. Jika perlu menganalisis beberapa patogen, maka jumlah primer yang diperlukan ditambahkan ke sampel.

Pada tahap ini, DNA mereplikasi templatnya menggunakan primer.

Kemampuan laboratorium dibatasi oleh ketersediaan primer untuk mikroorganisme tertentu, sehingga kisaran kemungkinannya ditentukan oleh ketersediaan sampel tersebut.

Tahap 3

Pada segmen ini terjadi peningkatan materi genetik patogen. Suatu enzim mendekati primer dengan templat dan mereproduksi untai DNA baru yang identik dengan untai asli.

Ketika sintesis selesai, satu siklus penuh reaksi berantai polimerase selesai. Lama kelamaan itu berlangsung rata-rata hingga 3 menit. Selama waktu ini, materinya berlipat ganda. Peningkatan lebih lanjut dalam jumlah rantai terjadi secara eksponensial, dan pada akhir analisis, 50-80 siklus telah diselesaikan.

Tahap 4

Suatu tahapan yang memerlukan perhatian dan kehati-hatian khusus dari pihak staf.

Penentuan mikroorganisme terjadi dengan menggunakan elektroforesis atau tanda pewarnaan. Saat menggunakan elektroforesis, faktor penentunya adalah panjang fragmen DNA, dan saat menggunakan label, perkembangan warna selama reaksi enzimatik.

Jenis tes PCR

Ada banyak variasi diagnostik PCR tersebut. Pilihan metode tertentu bergantung pada banyak faktor: diagnosis dugaan, kemampuan laboratorium yang tersedia, metode pengumpulan bahan, dll.

Jenis PCR yang paling umum digunakan adalah:

bersarang;
melangkah;
dengan start panas;
maya;
asimetris;
secara real-time, dll.

PCR waktu nyata lebih banyak digunakan, karena metode ini memiliki hasil paling akurat dan kecepatan pemrosesan data maksimum. Setelah menggunakannya, kesimpulannya siap dalam satu atau dua jam.

Metode ini banyak digunakan di bidang pediatri untuk mendeteksi virus dan infeksi darah, penyakit genetik, dan infeksi TORCH. Ahli neonatologi meresepkan diagnosis semacam itu dalam kasus-kasus bermasalah sejak hari-hari pertama kehidupan. Terkadang diagnosis semacam itu memungkinkan untuk mendeteksi infeksi cairan intrauterin, yang menimbulkan bahaya bagi perkembangan janin selama masa pembentukan aktif.

Jika seorang dokter memberikan rujukan untuk pemeriksaan dengan menggunakan reaksi berantai polimerase, maka ia harus menjelaskan jenis biomaterial apa yang perlu diberikan kepada pasien dan bagaimana mempersiapkan pengambilan sampel.

Analisis darah

Darah diambil sebagai biomaterial untuk pengujian jika dicurigai HIV, virus hepatitis, toksoplasma, herpes genital, dan sitomegali. Untuk sebagian besar patogen ini, sebelum penggunaan metode ini, diagnosis didasarkan pada deteksi antibodi terhadap patogen, yang sangat menunda waktu deteksi mikroba pada saat antibodi belum diproduksi.

Sebelum mendonorkan darah untuk diagnosis dalam kasus ini, tidak diperlukan persiapan khusus, namun sebaiknya sampel diambil saat perut kosong. Satu-satunya keadaan yang dapat mengubah hasil secara serius adalah penggunaan antibiotik, sehingga tes harus didahului beberapa hari atau minggu setelah minum obat tersebut, tergantung pada jenis antibiotiknya.

Di klinik paling modern, sistem vakum baru-baru ini digunakan untuk mengumpulkan darah untuk PCR, yang meminimalkan kerusakan pada kulit dan meminimalkan kemungkinan kontaminasi dari udara, instrumen, atau tangan teknisi laboratorium memasuki sampel.

Analisis noda

Ini digunakan baik dalam ginekologi dan venereologi untuk mengidentifikasi penyakit menular seksual. Smear PCR sering diresepkan selama kehamilan untuk mengidentifikasi faktor-faktor tersembunyi yang dapat berdampak buruk pada pembentukan janin atau perjalanan kehamilan.

Persiapan pemilihan bahan terdiri dari penghapusan total hubungan seksual beberapa hari sebelum prosedur. Douching dengan kalium permanganat atau infus herbal juga dilarang. Pada hari-hari kritis dan 2 hari setelahnya, apusan tidak diambil untuk analisis PCR.

Biomaterial dikumpulkan di laboratorium dari vagina, leher rahim, saluran serviks atau uretra.

Analisis PCR pada apusan memungkinkan Anda mengidentifikasi patogen yang resisten terhadap jenis antibiotik tertentu. Selain itu, indikasi pemeriksaan diagnostik jenis ini adalah:

kehamilan rumit tanpa alasan yang jelas;
perjalanan penyakit kelamin yang akut;
dugaan penyakit kelamin kronis;
mengidentifikasi penyebab infertilitas atau aborsi spontan.

Analisis tinja

Tes tinja menggunakan reaksi berantai polimerase diresepkan oleh spesialis untuk menentukan adanya infeksi. Persiapan pengambilan sampel feses untuk PCR adalah sebagai berikut:

hilangkan obat pencahar dalam bentuk supositoria, minyak atau obat oral selama beberapa hari;
Jangan mengonsumsi obat atau makanan yang memberi warna berbeda pada tinja sehari sebelumnya.

Bahan penentuan PCR sebaiknya disampaikan dalam wadah khusus tinja dengan tongkat. Bagian dalam wadah steril dan tidak boleh dilap atau dicuci. Saat mengumpulkan sampel, penting untuk memastikan bahwa Anda tidak menyentuh permukaan bagian dalam penerima, dan tidak boleh ada bekas urin di dalam sampel. Sebelum pemilihan, penggunaan enema dilarang.

Analisis urin

Studi PCR ini memungkinkan Anda mengekstrak sampel DNA suatu virus atau bakteri. Lebih baik mengumpulkan urin di pagi hari dengan perut kosong. Sebaiknya hal ini dilakukan langsung di laboratorium.

Syarat persiapan wajib untuk memperoleh hasil tes urine di laboratorium reaksi berantai polimerase:

tunggu 3 minggu setelah minum antibiotik;
jangan minum atau makan sebelum mengambil cairan;
larangan melakukan hubungan seks vagina satu hari sebelum pengambilan sampel;
Anda perlu memasukkan bagian pertama bahan ke dalam wadah setelah bangun tidur.

Interpretasi hasil

Hasil diagnostik diuraikan oleh dokter spesialis yang merujuk pasien untuk tes PCR. Protokol yang dikeluarkan oleh laboratorium dapat mencakup hasil PCR negatif atau positif:

Negatif - kasus di mana tidak ditemukan bagian dari agen penyebab dugaan penyakit, yaitu orang tersebut sehat dan belum pernah menderita penyakit ini akhir-akhir ini.
Positif - RNA atau DNA suatu patogen terdeteksi dalam sampel dan orang tersebut memerlukan perawatan.

Anda tidak boleh menafsirkan data yang diperoleh sendiri, karena norma usia dapat berbeda secara signifikan, dan titer yang berbeda menunjukkan tahapan penyakit dan pendekatan terapi yang sangat berbeda.

Berbekal hasil diagnosa PCR, dokter akan mudah menentukan daftar tindakan pengobatan yang diperlukan.

Keakuratan diagnosis PCR menjadikan teknik ini sangat diperlukan dalam mendiagnosis sejumlah besar penyakit dan memungkinkan identifikasi dan penghapusan proses patogen yang terjadi dalam tubuh manusia secara lebih efektif.

Reaksi berantai polimerase (PCR) adalah metode presisi tinggi di bidang diagnosis patologi herediter, infeksi, penyakit virus pada tahap apa pun (akut atau kronis), serta - pada tahap awal - sebelum manifestasi penyakit yang jelas dengan mengidentifikasi patogen berdasarkan DNA, RNA, yang merupakan materi genetik, dalam sampel yang diperoleh dari pasien. Dan hari ini kita akan berbicara tentang esensi, tahapan diagnostik dan prinsip metode reaksi berantai polimerase (PCR), serta biayanya.

Apa itu reaksi berantai polimerase

Dasar analisisnya adalah amplifikasi (penggandaan) - pembuatan banyak salinan dari bagian pendek DNA (asam deoksiribonukleat), yang mewakili kompleks genetik manusia. Penelitian ini memerlukan sejumlah kecil zat fisiologis (dahak, feses, kerokan epitel, cairan prostat, darah, sperma, cairan ketuban, lendir, jaringan plasenta, urin, air liur, cairan pleura, cairan serebrospinal). Dalam kasus ini, misalnya, bahkan satu mikroba berbahaya pun dapat dideteksi di saluran genitourinari pasien.

Teknik PCR (reaksi berantai polimerase) dikembangkan oleh ilmuwan Amerika K. Mullis, yang menerima Hadiah Nobel pada tahun 1993.

Digunakan secara aktif:

dalam diagnosis dini infeksi, genetik;
dalam pemeriksaan medis forensik ketika jumlah DNA yang tersedia untuk diperiksa sangat sedikit;
V kedokteran hewan, farmasi, biologi, genetika molekuler;
untuk identifikasi seseorang dengan DNA, konfirmasi ayah;
dalam paleontologi, antropologi, ekologi (saat memantau kualitas produk, faktor lingkungan).

Video ini akan memberi tahu Anda secara detail apa itu reaksi berantai polimerase:

Kepada siapa obat ini diresepkan?

Reaksi berantai polimerase dalam diagnosis penyakit menular adalah salah satu metode yang paling dapat diandalkan dengan akurasi dan keandalan tertentu. Misalnya, keandalan analisis PCR untuk klamidia dan banyak patogen lainnya mendekati 100% (mutlak). Paling sering, prosedur reaksi berantai polimerase diresepkan untuk pasien yang mengalami kesulitan dalam mengidentifikasi patogen tertentu selama diagnosis.

Tes PCR laboratorium digunakan:

untuk mendeteksi patogen, menyebabkan infeksi organ kemih dan genital yang sulit diidentifikasi menggunakan metode kultur atau imunologi;
untuk diagnosis ulang HIV pada tahap awal jika hasil tes awal positif tetapi meragukan (misalnya, pada bayi baru lahir dari orang tua yang terinfeksi AIDS);
untuk mengidentifikasi kanker pada tahap awal (studi tentang mutasi onkogen) dan menyesuaikan rejimen pengobatan secara individual untuk pasien tertentu;
untuk tujuan deteksi dini dan pengobatan potensial patologi keturunan.

Oleh karena itu, calon orang tua melakukan tes untuk mengetahui apakah mereka pembawa kelainan genetik, pada anak-anak, PCR menentukan kemungkinan terkena penyakit yang diturunkan.

untuk mendeteksi patologi janin pada tahap awal kehamilan (sel individu dari embrio yang sedang tumbuh diperiksa untuk mengetahui kemungkinan mutasi);
pada pasien sebelum transplantasi organ - untuk “pengetikan jaringan” (menentukan kompatibilitas jaringan);
untuk mengidentifikasi organisme patogen berbahaya dalam darah donor;
pada bayi baru lahir - untuk mengidentifikasi infeksi tersembunyi;
untuk mengevaluasi hasil pengobatan antivirus dan antimikroba.

Mengapa menjalani prosedur seperti itu?

Karena PCR adalah metode diagnostik yang sangat efektif, memberikan hasil hampir 100%, prosedur yang digunakan adalah:

untuk mengkonfirmasi atau mengecualikan diagnosis akhir;
penilaian cepat efektivitas terapi.

Dalam banyak kasus, PCR adalah satu-satunya tes yang mungkin untuk mendeteksi penyakit yang sedang berkembang jika metode diagnostik bakteriologis, imunologi, dan virologi lainnya tidak berguna.

Virus dideteksi menggunakan prosedur PCR segera setelah infeksi dan sebelum tanda-tanda penyakit muncul. Deteksi dini virus memungkinkan pengobatan yang cepat.
Apa yang disebut “viral load” (atau jumlah virus dalam tubuh) juga ditentukan melalui analisis DNA menggunakan metode kuantitatif.
Patogen tertentu (misalnya basil tuberkulosis Koch) sulit dan membutuhkan waktu terlalu lama untuk dibiakkan. Pengujian PCR memungkinkan deteksi cepat terhadap patogen minimal (hidup dan mati) dalam sampel yang sesuai untuk pengujian.

Analisis DNA patogen terperinci digunakan:

untuk menentukan sensitivitasnya terhadap jenis antibiotik tertentu, yang memungkinkan pengobatan segera;
untuk mengendalikan penyebaran epidemi pada hewan peliharaan dan liar;
untuk mengidentifikasi dan melacak spesies mikroba menular baru dan subtipe patogen yang telah memicu epidemi sebelumnya.

Jenis diagnostik

Metode standar

Analisis reaksi berantai polimerase dilakukan berdasarkan amplifikasi berganda (penggandaan) fragmen DNA dan RNA tertentu menggunakan enzim primer khusus. Sebagai hasil dari rantai penyalinan, diperoleh bahan yang cukup untuk penelitian.

Selama prosedur, hanya fragmen yang diinginkan (sesuai dengan kondisi spesifik yang ditentukan) yang disalin dan jika memang ada dalam sampel.

Video mendetail dengan diagram berguna ini menjelaskan cara kerja PCR:

Metode lain

PCR waktu nyata. Dalam jenis penelitian ini, proses identifikasi fragmen DNA tertentu dimulai setelah setiap siklus, dan bukan setelah menyelesaikan seluruh rantai yang terdiri dari 30-40 siklus. Jenis penelitian ini memungkinkan Anda memperoleh informasi tentang jumlah suatu patogen (virus atau mikroba) di dalam tubuh, yaitu melakukan analisis kuantitatif.
RT-PCR (mode transkripsi terbalik). Tes ini digunakan untuk mencari RNA beruntai tunggal untuk mendeteksi virus yang basis genetiknya adalah RNA (misalnya virus hepatitis C, virus imunodefisiensi). Dalam penelitian ini, enzim khusus digunakan - transkriptase balik dan primer spesifik dan DNA untai tunggal dibangun berdasarkan RNA. Kemudian untai DNA kedua diambil dari untai ini dan prosedur standar dilakukan.

Indikasi untuk pengujian

Prosedur PCR digunakan di klinik penyakit menular, neonatologi, kebidanan, pediatri, urologi, ginekologi, venereologi, neurologi, nefrologi, dan oftalmologi.

Indikasi untuk pengujian:

menentukan risiko berkembangnya kelainan genetik pada anak dengan kemungkinan patologi keturunan;
mendiagnosis kedua orang tua saat merencanakan kehamilan atau dalam kondisi serius ibu selama kehamilan sedang berlangsung;
kesulitan dalam pembuahan, mengidentifikasi penyebab infertilitas;
kecurigaan infeksi menular seksual pada tahap akut dan dengan gejala peralihan ke kronis;
deteksi penyebab proses inflamasi yang tidak diketahui asalnya;
kontak seksual biasa dan teratur tanpa pelindung;
menentukan sensitivitas mikroorganisme patogen terhadap antibiotik tertentu;
pasien dengan dugaan infeksi laten untuk mendeteksi patogen sebelum timbulnya gejala yang jelas (diagnosis praklinis);
pasien untuk memastikan kesembuhan setelah sakit (diagnosis retrospektif);:

Diagnostik juga digunakan jika perlu untuk mengidentifikasi patogen berikut secara akurat::

virus hepatitis (A B C G), imunodefisiensi manusia, sitomegalovirus;
Vibrio kolera;
virus herpes simpleks, spesies herpetiform;
retro - adeno - dan rhinovirus;
virus rubella, Epstein-Barr, varicella (Zoster);
parvo dan picornovirus;
bakteri Helicobacter pylori;
Legionella, jenis Escherichia coli yang patogen;
stafilokokus aureus;
patogen;
clostridia, difteri dan hemophilus influenzae;

Ini juga digunakan untuk menentukan infeksi:

Mononukleosis menular;
borreliosis, listeriosis, ensefalitis tick-borne;
kandidiasis yang disebabkan oleh jamur Candida;
infeksi menular seksual – trikomoniasis, ureaplasmosis, treponema pallidum, gardnerellosis, gonore, mikoplasmosis, klamidia;
TBC.

Kontraindikasi untuk

Karena prosedurnya tidak dilakukan pada pasien, tanpa dampak apa pun pada tubuh, tetapi dengan bahan biologis yang diambil untuk penelitian, tidak ada kontraindikasi PCR karena tidak adanya potensi bahaya.

Namun, biomaterial tidak diambil dari saluran serviks setelah prosedur kolposkopi. Pengajuan apusan dan kerokan untuk dianalisis hanya diperbolehkan 4-6 hari setelah akhir menstruasi dan penghentian total keputihan.

Apakah metode tersebut aman?

Tidak ada Pengaruh negatif pada pasien selama studi terisolasi biomaterialnya dalam kondisi laboratorium tidak mungkin dilakukan.

Persiapan prosedur (pengajuan zat biologis untuk dianalisis)

Cairan biologis, jaringan, atau sekresi tubuh apa pun berfungsi sebagai sampel untuk analisis PCR, yang mendeteksi DNA patogen asing. Bahan uji yang diambil berupa pengambilan darah dari vena, kerokan dari laring, rongga hidung, uretra, rongga pleura, leher rahim.

Sebelum prosedur diagnostik, dokter menjelaskan kepada pasien bahan apa yang akan dikumpulkan:

Saat memeriksa infeksi menular seksual, sekret dari alat kelamin, urin, dan apusan dari uretra dikumpulkan.
Saat menganalisis infeksi herpes, sitomegalovirus, mononukleosis, urin dan usap tenggorokan diambil untuk dianalisis, untuk hepatitis, toksoplasmosis, darah dari vena diambil.
Untuk tujuan diagnostik berbagai jenis Cairan serebrospinal dikumpulkan.
Dalam pulmonologi, sampel untuk dianalisis adalah dahak dan cairan pleura.
Saat melakukan penelitian tentang kemungkinan infeksi intrauterin selama kehamilan, cairan ketuban dan sel plasenta digunakan untuk analisis.

Keandalan dan keakuratan analisis bergantung pada sterilitas kondisi saat pengambilan bahan. Karena pengujian PCR sangat sensitif, kontaminasi apa pun pada bahan uji dapat merusak hasil.

Persiapan yang kompeten untuk pengiriman biomaterial tidak menimbulkan kesulitan bagi pasien. Ada rekomendasi tertentu:

saat menganalisis infeksi menular seksual:
- kecualikan kontak intim 72 jam sebelum mengirimkan materi;
- berhenti menggunakan produk vagina apa pun 3 hari sebelumnya;
- sejak sore hari sebelumnya, tidak melakukan kebersihan area pemeriksaan;
- kecualikan buang air kecil 3-4 jam sebelum mengambil sampel dari uretra;
berhenti minum antibiotik sebulan sebelum tes infeksi;
darah didonorkan pada pagi hari sebelum makan dan minum;
Sampel urine pagi pertama dikumpulkan dalam wadah steril setelah toilet intim menyeluruh.

Baca di bawah tentang bagaimana diagnosis dilakukan menggunakan metode reaksi berantai polimerase.

Bagaimana prosedur kerjanya?

Dengan melakukan studi PCR berulang kali di dalam reaktor (penguat atau thermal cycler) siklus tertentu berulang:

Langkah pertama adalah denaturasi. Air liur, darah, bahan biopsi, sampel ginekologi, dahak, yang diduga mengandung DNA (atau RNA) suatu patogen, ditempatkan dalam amplifier, di mana bahan dipanaskan dan DNA dipecah menjadi dua rantai terpisah.
Langkah kedua adalah anil atau sedikit pendinginan material dan menambahkan primer ke dalamnya yang dapat mengenali daerah yang diinginkan dalam molekul DNA dan mengikatnya.
Langkah ketiga adalah elongasi– terjadi setelah 2 primer melekat pada masing-masing untai DNA. Selama proses tersebut, fragmen DNA patogen selesai, dan salinannya terbentuk.

Siklus ini berulang seperti “reaksi berantai”, yang setiap kali menghasilkan penggandaan salinan fragmen DNA tertentu (misalnya, segmen tempat virus tertentu diprogram). Dalam beberapa jam, banyak salinan fragmen DNA terbentuk, dan keberadaannya dalam sampel terdeteksi. Setelah itu, hasilnya dianalisis dan dibandingkan dengan data dari database berbagai jenis patogen untuk menentukan jenis infeksinya.

Baca di bawah tentang menguraikan hasil dan kesimpulan berdasarkan reaksi PCR.

Menguraikan hasilnya

Hasil akhir penelitian dikeluarkan 1 – 2 hari setelah penyerahan bahan biologi. Seringkali - sudah pada hari pertama setelah analisis.

Analisis kualitatif

Negatif hasilnya berarti tidak ditemukan jejak agen infeksi pada bahan yang diajukan untuk pengujian.
Positif hasilnya berarti terdeteksinya virus atau bakteri patogen dalam sampel biologis dengan tingkat akurasi yang sangat tinggi pada saat penyerahan materi.

Jika hasilnya positif, tetapi tidak ada tanda-tanda peningkatan infeksi yang terdeteksi, keadaan tubuh ini disebut “pembawa sehat” tanpa gejala. Paling sering diamati ketika mengambil biomaterial dari tempat tertentu (saluran serviks, uretra, rongga mulut) pada penyakit virus. Dalam hal ini, pengobatan tidak diperlukan, tetapi pengawasan medis yang konstan diperlukan, karena ada kemungkinan:

penyebaran virus dari pembawa dan infeksi pada orang sehat;
aktivasi proses dan transisi penyakit ke bentuk kronis.

Namun jika hasil tes darahnya positif, hal ini menandakan bahwa infeksi telah menyerang tubuh, dan ini bukan lagi keadaan pembawa, melainkan suatu patologi yang memerlukan terapi khusus segera.

Analisis kuantitatif

Hasil kuantitatif ditentukan oleh seorang spesialis khusus untuk tipe tertentu infeksi. Berdasarkan hal itu, dimungkinkan untuk menilai tingkat perkembangan dan stadium penyakit, yang memungkinkan untuk meresepkan pengobatan yang tepat pada waktu yang tepat.

biaya rata-rata

Harga reaksi berantai polimerase ditentukan oleh: jenis penelitian, kesulitan mengidentifikasi patogen, kesulitan pengumpulan bahan biologis, jenis analisis (kualitatif atau kuantitatif), dan tingkat harga di laboratorium.

Sebaliknya, ketika mempelajari PCR, beberapa patogen dapat diidentifikasi sekaligus dengan mengumpulkan satu jenis bahan untuk dianalisis. Hal ini memungkinkan Anda menghemat tes laboratorium lainnya.

Perkiraan biaya analisis PCR dalam rubel:

gonococcus, gardnerella, trichomonas vaginalis – dari 180
klamidia trachomatis – dari 190
virus papiloma – dari 380 hingga 500
biocenosis saluran urogenital pada wanita (penilaian mikroflora kuantitatif dan kualitatif) – dari 800.

Terlebih lagi informasi berguna mengenai studi PCR terdapat pada video di bawah ini:

Reaksi berantai polimerase telah dikenal selama 30 tahun. Ini banyak digunakan di banyak bidang, mulai dari arkeologi hingga genetika. Ini adalah metode PCR yang membantu menentukan ayah, tetapi paling sering digunakan untuk mengidentifikasi berbagai penyakit menular dalam tubuh manusia. Apa itu analisis PCR?

Ini tidak lebih dari tiruan dari proses reproduksi DNA, sebagai akibatnya sejumlah besar molekul identik diperoleh dari sebuah fragmen kecil molekul DNA selama periode waktu tertentu (biasanya beberapa jam), yang sudah dapat diperoleh. dipelajari. Apakah ini mengingatkanmu pada sesuatu? Sangat mirip dengan kloning. Ini adalah reaksi berantai polimerase yang menjadi dasar kloning dan digunakan dalam reproduksi jaringan di laboratorium. Nah, dalam dunia kedokteran, analisis PCR digunakan untuk mengidentifikasi bakteri (mikoplasma, , dan patogen), virus (dan papillomavirus), jamur (patogen) dan protozoa (Trichomonas) dalam tubuh manusia.

Metode diagnosis molekuler patogen menular ini adalah yang paling sensitif. Memungkinkan deteksi bahkan satu fragmen DNA dalam sampel, metode PCR hampir tidak memiliki batas sensitivitas. Dan pada kebanyakan kasus, hasilnya menunjukkan akurasi 100%, terutama saat mendiagnosis infeksi bakteri. Itu tidak pernah memberikan hasil positif palsu.

Ini juga bersifat universal, karena memungkinkan Anda mengidentifikasi beberapa mikroorganisme secara bersamaan dalam satu sampel, menggunakan metode bakteriologis cara yang berbeda budidaya untuk berbagai kelompok patogen. Selain itu, PCR sangat menyederhanakan tugas peneliti, mengurangi waktu pelaksanaan pengujian menjadi 24 jam, dan menyederhanakan persyaratan pengangkutan sampel. Jika bahan untuk metode bakteriologis dan virologi harus hidup, maka untuk metode PCR apa pun yang mengandung DNA, bahkan sel mati, bisa digunakan.

Analisis PCR untuk infeksi sangat penting karena sebagian besar infeksi yang menyerang tubuh manusia berkembang tanpa gejala atau memiliki gejala serupa. Misalnya saja metode PCR yang banyak digunakan untuk mengidentifikasi penyebab penyakit liver, antara lain A, B, C, D, E, serta virus herpes simpleks. Untuk memerangi setiap virus, perlu menggunakan taktik pengobatan yang sangat berbeda. Oleh karena itu, untuk meresepkan terapi yang efektif, dokter perlu mengidentifikasi patogen secara akurat. Dan jika penelitian jangka panjang dilakukan, infeksinya bisa menjadi kronis, menyebabkan komplikasi yang sangat berbahaya selama kehamilan atau penyakit penyerta lainnya. Dan metode PCR-lah yang menjadi asisten utama dalam diagnosis yang cepat dan akurat.

Tetapi di sini Anda perlu memahami bahwa, sebagai satu-satunya metode untuk mengidentifikasi beberapa mikroorganisme (misalnya, mikoplasma), PCR mungkin sama sekali tidak cocok untuk yang lain (stafilokokus, streptokokus, dll.). Oleh karena itu, seorang spesialis harus memilih metode diagnostik dan meresepkan pengobatan . Tidak ada gunanya pergi ke laboratorium sendirian dan melakukan semua tes secara berturut-turut. Mereka mungkin sama sekali tidak berguna. Dan di klinik swasta, atas permintaan Anda dan atas uang Anda, mereka akan melakukan tes apa pun untuk Anda, bahkan tanpa menanyakan mengapa Anda membutuhkannya.

Cara mengikuti tes PCR

Untuk melakukan studi PCR, cairan dan sekresi biologis digunakan tubuh manusia, yang mungkin mengandung mikroba dan fragmennya. Ini termasuk: darah, air liur, dahak dan urin. Selain itu, kerokan sel epitel selaput lendir uretra dan saluran serviks diambil untuk analisis PCR. Misalnya untuk mendeteksi virus HIV dan hepatitis, darah diambil dari pembuluh darah vena. Untuk mendiagnosis infeksi genital, keputihan dan noda dari serviks atau uretra dianalisis. Untuk mendiagnosis mononukleosis menular, usap tenggorokan digunakan.

Persiapan analisis PCR

Sebelum mengikuti tes, Anda harus berkonsultasi dengan dokter Anda dan mengikuti rekomendasinya dengan cermat. Tanyakan kepada dokter bahan apa saja yang akan diambil untuk penelitian. Tes darah PCR dilakukan dengan perut kosong. Namun sebelum melakukan tes PCR berupa kerokan sel epitel, dokter menyarankan pasien minum bir di malam hari, mandi dan berhubungan seks. Kedengarannya aneh, tapi semua ini mengaktifkan infeksi pada alat kelamin, yang bisa terjadi dalam bentuk yang sangat ringan, dan membantu mengidentifikasinya.

Menguraikan analisis PCR

Hasil tes PCR bisa positif atau negatif. Hal ini selalu dicatat dalam dokumen yang harus dikeluarkan oleh laboratorium. Hasil positif berarti DNA infeksi terdeteksi pada bahan biologis yang disumbangkan pasien. Hasil negatif berarti tidak ada infeksi pada tubuh manusia.

Karena metode PCR sangat sensitif, metode ini harus digunakan untuk memantau efektivitas pengobatan dengan sangat hati-hati dan hanya beberapa minggu setelah terapi. Toh, fragmen DNA dari patogen yang sudah mati pun akan memberikan hasil tes PCR yang positif.

Reaksi berantai polimerase membantu dokter mendiagnosis infeksi yang terjadi pada tubuh manusia dalam bentuk laten, mencegah perkembangan dan kerusakan parah organ dalam. Pantau kesehatan Anda dengan cermat dan pada kecurigaan pertama adanya infeksi, konsultasikan dengan dokter.

Dalam kebanyakan kasus, pasien harus menghadapi situasi di mana diagnostik PCR diperlukan untuk memeriksa atau menentukan penyakitnya. Penting untuk memahami apa itu dan mengapa itu diperlukan.

Metode reaksi berantai polimerase (PCR) adalah tes yang membantu mengidentifikasi banyak penyakit tahap awal perkembangan. Esensinya adalah menemukan DNA atau RNA patogen yang ada di dalam tubuh. PCR memungkinkan Anda menentukan patogen jika jenis penelitian lain tidak efektif.

Kepopuleran metode ini adalah kesederhanaan dan luasnya penggunaan. Ini digunakan oleh dokter untuk mendiagnosis berbagai penyakit. Memungkinkan Anda dengan cepat melakukan studi kuantitatif dan genomik yang kompleks.

Salah satu aplikasi medis terpenting dari metode PCR klasik adalah deteksi mikroorganisme yang mampu menyebabkan kondisi patologis.

Inti dari analisis PCR

Diagnostik PCR (yang dijelaskan oleh biologi molekuler) adalah metode kloning molekuler yang digunakan untuk menganalisis rangkaian pendek DNA yang terdapat dalam jumlah minimal dalam sampel yang mengandung materi genetik apa pun. Metode ini sering disebut dengan “mesin penyalin DNA”.

Diagnostik PCR dilakukan secara in vitro (di luar tubuh) di laboratorium dan didasarkan pada proses alami penggandaan DNA sebelum membelah. Selain kemampuan mendeteksi virus, bakteri, atau mikroorganisme lain dalam suatu sampel, PCR memungkinkan Anda mengidentifikasi jumlahnya.

Untuk penyakit seperti virus hepatitis C atau human immunodeficiency virus (HIV), viral load merupakan indikator yang baik mengenai lokasi penyakit dan seberapa efektif terapinya.

Berbekal informasi ini, dokter dapat menentukan kapan memulai pengobatan dan memantau prosesnya. Hal ini memungkinkan kami untuk menciptakan pendekatan individual untuk setiap pasien.

Diagnostik PCR mencakup tiga tahap, yang masing-masing tahap meningkatkan jumlah DNA target secara signifikan. Sebagai hasil dari reaksi ini, diperoleh lebih dari satu miliar salinan DNA asli atau “target”, yang memungkinkan untuk menilai keberadaan virus di dalam tubuh. Ini adalah properti utama dari metode PCR.

Keuntungan dan kerugian dari metode ini

Diagnostik PCR (yang dijelaskan di atas) dijelaskan secara rinci oleh Keri Mullis pada tahun 1983. Sejak itu, metode ini menjadi sangat populer dalam praktik laboratorium.

Keuntungan utama dari jenis penelitian ini adalah:

keserbagunaan;
kecepatan hasil;
kemungkinan besar memperoleh hasil yang dapat diandalkan;
kekhususan;
berbagai penyakit yang dapat diidentifikasi.

Fleksibilitas metode PCR terletak pada kemungkinan menggunakan bahan fisiologis manusia. Bahkan satu helai rambut saja sudah cukup untuk dianalisis.

Proses pemrosesan data berkat otomatisasi dapat memakan waktu beberapa jam. Spesifisitasnya terdiri dari isolasi fragmen DNA tertentu yang merupakan karakteristik patogen tertentu. Dengan menggunakan analisis PCR, banyak penyakit yang dapat didiagnosis, baik pada stadium akut maupun stadium laten.

Namun, meskipun memiliki banyak kelebihan, metode diagnostik PCR juga memiliki kelemahan:

kemungkinan hasil positif palsu;
sensitivitas tinggi;
variabilitas mikroorganisme.

Kerugian utama dari metode ini adalah ketidakmampuan PCR untuk membedakan mikroorganisme hidup dan mikroorganisme mati. Biasanya, ini mengacu pada situasi di mana keberhasilan pengobatan harus dinilai. Dalam hal ini, jika penyakitnya telah diobati, maka sel-sel mati tersebut tetap berada di dalam tubuh manusia untuk beberapa waktu dan untuk pembaharuan totalnya diperlukan waktu antara 4 sampai 6 minggu.

Sensitivitas yang tinggi merupakan keuntungan dan sekaligus kerugian. Beberapa mikroorganisme hadir dalam jumlah kecil di dalam tubuh. Oleh karena itu, dalam hal ini metode diagnostik ini tidak informatif, dan disarankan untuk menggunakan jenis penelitian lain.

Mikroorganisme apa pun dapat bermutasi. Dan meskipun proses amplifikasi menggunakan fragmen tertentu yang paling tidak rentan terhadap perubahan, proses amplifikasi masih dapat mengalami mutasi dan menjadi tidak terlihat oleh sistem pengujian. Situasi ini menjelaskan fakta bahwa sistem pengujian laboratorium yang berbeda dapat menunjukkan hasil yang sangat berbeda.

Di bidang apa metode ini digunakan?

Pengujian PCR dapat digunakan dalam praktik klinis untuk mengidentifikasi berbagai penyakit. Banyak digunakan dalam ginekologi, urologi, gastroenterologi, onkologi, dll. Selain itu, efektif digunakan dalam ilmu forensik untuk membangun identitas dan membangun ayah.

Jenis penelitian ini digunakan pada tahap perencanaan dan selama kehamilan. Analisis infeksi TORCH dilakukan untuk mendeteksi adanya infeksi pada tubuh wanita. Penyakit yang disebabkan oleh salah satu infeksi ini mungkin ringan bagi seorang wanita, namun menyebabkan cacat bawaan yang serius pada janin, hingga kematiannya.

Selain itu, metode diagnostik PCR membantu menentukan kecenderungan genetik seseorang untuk mengembangkan penyakit tertentu di masa depan.

Infeksi apa yang dapat dideteksi dengan diagnostik PCR?

Metode PCR membantu mengidentifikasi virus, bakteri, dan jamur.

Penyakit paling umum yang dapat didiagnosis dengan menggunakannya:

Bahan biologis apa yang sedang dipelajari?

Dengan mempertimbangkan penyakit, gejala dan tujuan penelitian, diagnosis PCR dapat menggunakan cairan fisiologis atau partikel jaringan apa pun.

Bisa jadi:

darah;
air liur;
dahak;
air seni;
kotoran;
usap orofaring;
sepotong jaringan yang terkena;
cairan sinovial;
kerokan dari vagina pada wanita atau dari uretra pada pria;
ejakulasi;
rambut dan lain-lain.

Untuk penyakit pada sistem genitourinari, diambil urin atau apusan dari vagina pada wanita atau dari uretra pada pria. Darah vena disumbangkan untuk diagnosis penyakit seperti HIV, hepatitis berbagai jenis, infeksi TORCH.

Untuk mengecualikan atau memastikan onkologi, selama intervensi bedah, potongan jaringan diambil untuk biopsi.

Bagaimana mempersiapkan analisis

Kekhasan persiapan penelitian tergantung pada biomaterial yang diserahkan. Anda juga harus ingat bahwa perlu menghindari penggunaan antibiotik dan obat lain. Untuk memantau efektivitas pengobatan, interval setelah minum obat harus dijaga minimal 4 minggu.

Darah disumbangkan pada pagi hari dengan perut kosong. Urine dan feses harus ditempatkan dalam wadah yang telah ditentukan dan benar-benar steril. Sementara itu, sebelum mengumpulkan urin, perlu dilakukan kebersihan alat kelamin luar.

Jika Anda melakukan tes smear, Anda harus:

jangan buang air kecil selama 3 jam;
Tidak disarankan untuk mencuci dan melakukan douche sehari sebelumnya (untuk wanita);
menghentikan aktivitas seksual satu hari sebelumnya;
Wanita harus menjalani tes smear pada pertengahan siklus.

Tahapan penelitian PCR

Sebelum memulai PCR, DNA harus diekstraksi dari sampel. Ekstraksi DNA adalah proses multi-langkah yang dapat dilakukan secara manual atau instrumental.

Setelah sampel disiapkan, proses PCR tiga langkah dimulai:

pemisahan DNA target (denaturasi);
amplifikasi (reproduksi) fragmen DNA;
deteksi (deteksi) fragmen DNA yang diperkuat.

Tahap pertama PCR disebut denaturasi. Esensinya adalah tabung reaksi berisi sampel DNA dipanaskan suhu tinggi(kira-kira 90 derajat). Karena suhu tinggi, ikatan lemah antara nukleotida yang membentuk kode molekul hancur. Hal ini menghasilkan pemisahan DNA atau RNA untai ganda menjadi dua untai terpisah.

Untuk “kemurnian” penelitian, larutan khusus ditambahkan ke biomaterial yang diteliti, yang melarutkan zat organik. Lamanya tahap ini bergantung pada jenis bahan yang diuji dan agen penularnya.

Diagnostik PCR (yang dijelaskan di atas) pada tahap kedua mereproduksi fragmen DNA berdasarkan DNA infeksi itu sendiri. PCR tidak menyalin semua asam nukleat dalam sampel. Itu hanya menyalin urutan khusus kode genetik, fragmen pendek (primer).

Pada tahap kedua, tabung reaksi didinginkan. Seluruh proses PCR diotomatisasi menggunakan mesin yang disebut termostat atau cycler dan dapat diselesaikan dalam waktu beberapa jam. Mesin PCR diprogram untuk mengubah suhu campuran reaksi setiap beberapa menit. Hal ini terjadi agar fragmen pendek dapat berikatan dengan templat beruntai tunggal.

Amplifikasi terjadi dalam 30-40 siklus. Selama periode ini, dokter laboratorium menyalin fragmen DNA dan meningkatkan jumlahnya menggunakan metode reaksi berantai. Jadi, pada setiap siklus, jumlah salinannya meningkat hingga beberapa juta atau bahkan miliaran.

Pada penelitian tahap ketiga, keberadaan DNA virus dan bakteri terdeteksi. Hal ini dilakukan dengan mendistribusikan campuran yang dihasilkan dan menambahkan larutan khusus ke dalamnya. Cairan ini memungkinkan fragmen DNA memperoleh warna tertentu di bawah pengaruh sinar ultraviolet. Ini merupakan indikator adanya mikroba patogen dalam tubuh manusia.

PCR selama kehamilan

Diagnostik PCR (yang dijelaskan di atas) dapat diresepkan untuk pertama kalinya selama kehamilan, karena ini merupakan prosedur wajib. Metode ini membantu mengidentifikasi infeksi tersembunyi dan risiko cacat pada janin.

Untuk melakukan analisis gunakan:

Ada penyakit menular yang dapat berdampak buruk pada perkembangan janin, menyebabkan cacat, menyebabkan kelahiran prematur, dan keguguran. Mereka sangat berbahaya pada trimester pertama kehamilan dan, dalam banyak kasus, merupakan indikasi medis untuk penghentian kehamilan. Infeksi ini secara kolektif disebut kompleks TORCH.

Analisis PCR membantu mengetahui ada tidaknya infeksi pada tubuh ibu hamil. Sering dilakukan pada tahap perencanaan kehamilan atau pada trimester pertama. Jika hasilnya positif, diperlukan tes ulang. Dan hanya setelah konfirmasi hasilnya, pengobatan yang tepat ditentukan.

PCR untuk diagnosis HIV

Metode PCR untuk mendiagnosis infeksi HIV adalah tes yang mahal dan digunakan sesuai dengan kebutuhan indikasi khusus. Ini termasuk donasi, dan juga dapat diresepkan untuk pasien yang terluka dalam kecelakaan mobil dengan pengidap HIV.

PCR membantu menentukan adanya infeksi tahap awal sebelum tubuh memproduksi antibodi terhadap HIV. Hasil dengan persentase yang tinggi Studi tersebut dapat menunjukkan kemungkinannya dalam waktu 5-14 hari setelah virus masuk.

Dalam kasus lain, keberadaan virus dalam tubuh manusia membantu pembentukan enzim immunosorbent assay (ELISA). Ini mendeteksi antibodi terhadap HIV dalam darah seseorang, yang mulai diproduksi 1-3 bulan setelah infeksi. Penentuan kuantitatif dan analisis mikroorganisme diperlukan untuk memantau pengobatan pasien.

PCR untuk mendiagnosis hepatitis

Virus hepatitis C adalah penyakit serius yang dapat menyebabkan perkembangan sirosis hati. Selama masa inkubasi yang bisa mencapai 12 bulan, virus tidak memanifestasikan dirinya sama sekali, pasien praktis tidak menular, dan virus tidak dapat dideteksi dengan tes darah rutin.

Seringkali, jika tidak diobati tepat waktu, penyakit ini menjadi kronis dan mengancam berbagai komplikasi.

Bila terinfeksi hepatitis B, masa inkubasinya tidak terlalu lama dan gejala pertama baru terlihat setelah 4 minggu. Pada periode inilah ELISA dapat menunjukkan keberadaan virus di dalam tubuh.

Metode PCR memungkinkan:

mengidentifikasi penyakit pada tahap perkembangan inkubasi;
menyelesaikan analisis yang meragukan dari penelitian lain;
mengevaluasi efektivitas terapi antivirus.

Tidak adanya DNA virus hepatitis setelah pengobatan merupakan tanda efektivitasnya.

Tes tuberkulosis

Perkembangan tuberkulosis dipicu oleh basil Koch, yang dapat masuk ke tubuh manusia melalui tetesan udara. Penyakit ini memiliki dua bentuk: tersembunyi dan terbuka. Dalam kasus pertama, orang yang terinfeksi bukanlah pembawa infeksi dan mikobakteri dalam dahak tidak terdeteksi bahkan dengan menggunakan PCR. Bentuk ini masih berbahaya karena mampu memasuki tahap terbuka.

Tahap terbuka (aktif) menimbulkan bahaya bagi orang lain meskipun aturan kebersihan diri dipatuhi dengan ketat. Fluorografi, tomografi, dan rontgen digunakan untuk mendiagnosis penyakit. dada. Tes kulit tuberkulasi (tes Mantoux) juga digunakan untuk tujuan ini. Tapi kebanyakan metode yang efektif penelitiannya adalah PCR.

Sampel berikut digunakan sebagai sampel uji:

darah;
dahak;
cairan bronkial.

PCR untuk mendiagnosis HPV

Diagnosis HPV dilakukan dengan adanya gejala penyakit seperti papiloma dan kutil di area genital. Selain itu, penelitian ini ditentukan pada tahap perencanaan kehamilan, jika terjadi infertilitas, keguguran, serta dalam situasi infeksi pada salah satu pasangan, karena salah satu mekanisme penularan virus adalah melalui hubungan seksual.

Yang paling berbahaya bukanlah keberadaan virus di dalam tubuh, melainkan jenisnya. Beberapa jenisnya (16 dan 18) bersifat sangat onkogenik dan dapat menyebabkan kanker serviks pada wanita. Metode PCR dapat ditentukan bersamaan dengan jenis penelitian lainnya. Untuk analisis, apusan dari alat kelamin paling sering digunakan. Darah, urin, dan keputihan sangat jarang digunakan sebagai biomaterial.

Untuk herpes

Tes ini mendiagnosis infeksi genital dengan virus herpes simpleks tipe 1 dan 2 (HSV1/HSV2). Jika hasil HSV2 positif, Anda harus dites HIV dan penyakit menular seksual lainnya. Analisisnya membutuhkan darah vena pasien.
Urine, sekret, dan isi ruam juga dapat diperiksa jika ada gejala.

Pemeriksaan PCR komprehensif

Jika diindikasikan, atau untuk tujuan pencegahan penyakit, serangkaian tes PCR dapat diresepkan. Paling sering, penggagasnya adalah pasien itu sendiri, ada kasus ketika pemeriksaan komprehensif dilakukan untuk mencegah berjangkitnya penyakit tertentu di wilayah tertentu.

PCR-12 adalah studi komprehensif yang mencakup infeksi berikut:

Hepatitis.
Herpes.
PMS.
TBC.
Radang otak.
Kandidiasis.
Infeksi Helicobacter pylori.
Sitomegalovirus.
Mononukleosis.
Oncovirus.
Listeriosis.

Penjelasan analisis PCR

Setelah dilakukan analisa menggunakan metode PCR, baru dapat diumumkan hasil positif atau negatifnya.

Hasil diagnosa PCR adalah sebagai berikut. Dokter akan memberi tahu Anda apa itu dan bagaimana menguraikannya

Akurasi diagnostik PCR

Dalam kebanyakan kasus, diagnostik PCR memberikan hasil yang sangat akurat. Namun dalam beberapa kasus, metode penelitian tambahan diperlukan untuk memastikan diagnosis yang benar.

Apa yang dapat menyebabkan hasil yang salah?

Hasil positif palsu dapat terjadi karena ketidakpatuhan terhadap aturan pengumpulan analisis dan pelaksanaan prosedur penelitian itu sendiri.

Pasien sendiri mungkin menjadi penyebab informasi palsu jika persiapan pengiriman biomaterial tidak memadai. Peralatan laboratorium dan profesionalisme dokter dapat mempengaruhi hasil penelitian secara langsung.

Di mana mendapatkan diagnostik PCR

Diagnostik PCR dilakukan di klinik dan laboratorium swasta atas perintah dokter atau atas prakarsa pasien sendiri untuk tujuan pencegahan.
Preferensi harus diberikan kepada klinik dan laboratorium dengan peralatan modern yang telah berada di pasar medis selama beberapa tahun dan telah membuktikan diri.

Analisis PCR: biaya dan waktu

Metode diagnostik ini mahal. Harganya berkisar antara 200 hingga 500 rubel untuk setiap jenis. Pemeriksaan komprehensif untuk mengetahui adanya beberapa infeksi dapat menghemat banyak dibandingkan dengan membayar untuk setiap pemeriksaan individual.

Durasi penelitian tergantung pada jenis infeksi dan dapat memakan waktu 1 hingga 5 hari. Selain itu, indikator-indikator ini bergantung pada peralatan laboratorium dan kualifikasi pekerja medis.

Diagnostik PCR (yang dijelaskan secara rinci dalam artikel ini) adalah metode penelitian yang paling akurat dan tercepat. Ini adalah salah satu penemuan terpenting di abad ke-20. dalam kedokteran.

Berkat metode ini, penyembuhan menyeluruh terhadap banyak penyakit menjadi mungkin. Namun kita tidak boleh lupa bahwa PCR juga memiliki beberapa kelemahan, dan efektivitasnya terkadang meningkat seiring dengan penggunaan metode penelitian lainnya.

Format artikel: Vladimir yang Agung

Video tentang diagnostik PCR

Tentang akurasi PCR:

DI DALAM pengobatan modern Analisis PCR terhadap cairan biologis tubuh sangat akurat dan informatif. Dengan menggunakan analisis ini, keberadaan partikel virus dan mikroba di dalam tubuh dapat dideteksi, meskipun penyakitnya tersembunyi dan tidak memberikan gejala apa pun.

Apa maksudnya meresepkan tes PCR untuk Anda? Singkatan ini adalah singkatan dari metode reaksi berantai polimerase - ini adalah cara pelaksanaan yang khusus penelitian laboratorium. Dengan metode ini, bahan biologis yang diperoleh dari pasien ditempatkan pada alat khusus. Satu set enzim reagen ditambahkan ke media uji, yang membantu mereproduksi materi genetik patogen (virus atau mikroba). Reaksi tersebut menghasilkan salinan DNA atau RNA dalam jumlah besar, sehingga memungkinkan identifikasi dengan membandingkannya dengan database infeksi virus dan mikroba.

Apa arti hasil tes PCR? Jika ada agen penyebab infeksi apa pun di dalam tubuh manusia, bahkan yang tersembunyi, analisis ini tidak hanya akan mengungkapkan keberadaannya, tetapi juga berapa jumlah infeksi ini yang ada di dalam tubuh.

Untuk menguji infeksi dengan metode PCR, Anda dapat memeriksa seluruh cairan biologis tubuh - darah, urin, air liur, cairan genital, lendir tenggorokan dan hidung. Analisis ini memerlukan bahan yang sangat sedikit, karena jika terdapat patogen, dengan mereproduksi salinannya, konsentrasi informasi genetik dibawa ke tingkat tertentu yang akan mengidentifikasi mikroba atau virus dan menentukan jenisnya. Keakuratan analisis PCR sangat tinggi, dengan bantuan analisis ini, saat ini hampir semua infeksi virus, mikroba, dan infeksi lainnya yang tersebar luas dapat ditentukan.

Namun apa yang paling sering diungkapkan oleh analisis PCR? Daftar infeksi yang dapat dideteksi dengan metode ini antara lain infeksi, termasuk infeksi yang berbahaya secara sosial seperti TBC atau hepatitis B dan C. Metode yang sama dapat mendeteksi infeksi HIV, infeksi klamidia dan ureaplasma, mikoplasmosis baik pada sistem pernapasan maupun genital. Dengan menggunakan analisis ini, sariawan, vaginosis bakterial, dan trikomoniasis terdeteksi. Kemampuan metode ini memungkinkan untuk mengidentifikasi infeksi tersembunyi - berbagai jenis herpes, HPV (papilomavirus), serta mengidentifikasi mikroba khusus yang bertanggung jawab atas perkembangan sakit maag - Helicobatera.

Saat ini, Anda dapat melakukan tes PCR di hampir semua laboratorium swasta atau publik. Jenis tes ini dilakukan pada semua orang, anak-anak dan orang dewasa. Tergantung pada tujuan analisis, bahan biologis yang berbeda dianalisis berdasarkan jenis kelamin.

Jadi, analisis PCR pada pria dilakukan terhadap darah atau urin, sekret uretra, lendir dari tenggorokan atau hidung, cairan prostat atau bahkan sperma. Analisis PCR pada wanita dimungkinkan pada darah dan urin, sekret vagina, sekret uretra, lendir hidung dan faring.

Analisis PCR sangat sering digunakan selama kehamilan, dengan bantuannya, infeksi tersembunyi terdeteksi dalam cairan atau darah vagina, memerlukan pemantauan khusus selama periode ini, dan terkadang perawatan yang memadai.

Bagaimana cara PCR diambil?

Tes infeksi menggunakan metode ini ditentukan oleh dokter, seringkali bahannya dikumpulkan segera di ruang praktik dokter - ahli urologi atau ginekolog. Bagaimana analisis PCR dilakukan?

Bahan yang dipelajari dicampur dengan reagen di laboratorium dan ditunggu reaksinya. Ketika patogen hadir, salinan DNA atau RNA mereka berkembang biak. Perangkat ini membandingkan fragmen materi genetik yang teridentifikasi dengan database dan secara akurat mengidentifikasi agen penular. Jika perlu, jumlah patogen dalam cairan tubuh tertentu juga ditunjukkan. Biasanya penelitian berlangsung tidak lebih dari 1-2 hari, bila perlu dilakukan tes cepat.

Dari mana Anda mendapatkan analisis PCR? Hal ini tergantung pada jenis patogen yang dicurigai. Kalau HIV atau hepatitis diambil darahnya, kalau infeksi menular seksual diambil apusan dari uretra atau vagina. Jika dicurigai mononukleosis atau herpes, usap tenggorokan diambil. Urine, cairan serebrospinal, keluarnya luka, dahak, dll juga bisa digunakan.

Tes darah PCR

Untuk hasil yang akurat dan diagnosis infeksi, penting untuk mendonorkan darah jam pagi dalam keadaan perut kosong. Tes darah menggunakan PCR dapat mengidentifikasi patogen penyakit berbahaya- HIV, hepatitis, sifilis. Selama periode eksaserbasi dan aktivitas virus, virus herpes, papiloma, dan beberapa lainnya dapat dideteksi di dalam darah.

Analisis PCR: persiapan

Untuk keakuratan analisis yang mutlak, persiapan yang tepat adalah penting. Cara termudah untuk mempersiapkan tes darah adalah tidak ada batasan pola makan atau aktivitas, darah harus diambil pada pagi hari, dengan perut kosong. Tes urine dilakukan setelah mencuci alat kelamin, dari bagian tengah ke dalam wadah khusus yang steril. Analisis PCR dari saluran genital layak dilakukan perhatian khusus, jadi penting untuk mengetahui cara mempersiapkannya. Satu hari sebelum pemeriksaan, dilarang berhubungan seks, dianjurkan untuk tidak buang air kecil sebelum pemeriksaan. Selama menstruasi pada wanita, tanggal analisis ditunda 3-5 hari sejak keluarnya cairan terakhir.

Berapa lama waktu yang dibutuhkan untuk melakukan tes PCR?

Tergantung pada kemampuan laboratorium, analisis dapat disiapkan dari beberapa jam hingga beberapa hari. Rata-rata berapa hari tes PCR berlangsung? Biasanya ini satu atau dua hari. Pada situasi darurat analisis dapat dilakukan pada hari yang sama, dalam beberapa jam.